ROBLETO18

EDITORIAL=20

=20

DOCTRINA = EXTRANJERA=20

El curso de la criminolog=EDa.=20 Eugenio Ra=FAl = Zaffaroni

Un an=E1lisis cr=EDtico de la visi=F3n de = Zaffaroni sobre=20 el curso actual de la criminolog=EDa. Susana Murillo, = Carlos=20 Elbert

Procedimimiento abreviado y juicio por=20 jurados. Alberto=20 Bovino

DOCTRINA = NACIONAL=20

La Ley de Armas y la violencia en Costa=20 Rica. El=EDas=20 Carranza

La historia =BFMala consejera? A prop=F3sito de la = reforma al=20 proceso penal. Walter Antill=F3n

El claroscuro de la seguridad ciudadana en Costa = Rica. Sus=20 deficiencias hist=F3ricas y las disfunciones de la reforma del = proceso=20 penal. Fernando=20 Cruz Castro

Relaciones administraci=F3n-jurisdicci=F3n en la = ejecuci=F3n penal=20 seg=FAn el nuevo C=F3digo Procesal Penal (1996). Jos=E9 Manuel Arroyo = Guti=E9rrez

Algunos apuntes sobre los delitos=20 burs=E1tiles. Manuel Rojas Salas

La conciliaci=F3n penal en = Iberoam=E9rica. Daniel = Gonz=E1lez=20 Alvarez

=20

JURISPRUDENCIA

Jurisprudencia de casaci=F3n = penal. Mart=EDn Rodr=EDguez = Miranda

Jurisprudencia constitucional. Mart=EDn Rodr=EDguez = Miranda, Lucila=20 Monge Pizarro

=93EL A.D.N.=20 Y SU IMPORTANCIA EN LA INVESTIGACION=20 CRIMINAL=CDSTICA=94.=20

=20

Lic.=20 Jaime Robleto Guti=E9rrez
Defensor=20 P=FAblico, San Jos=E9

=93Pero=20 los castigos no deben expresar desprecio; un criminal es siempre = un=20 hombre...=94 (Federico Nietzche, El Ocaso de los Idolos).=20

AGRADECIMIENTOS: =20

A=20 la Doctora Sandra Silva del Centro de Investigaci=F3n en = Biolog=EDa Molecular=20 y Celular de la Universidad de Costa Rica. Por su apoyo = desinteresado, su=20 enorme calidad humana y sapiencia forense. =

A=20 la Doctora Marta Espinoza de la Unidad de A.D.N. de la Secci=F3n = de=20 Bioqu=EDmica del Departamento de Laboratorio de Ciencias Forenses = del=20 Organismo de Investigaci=F3n Judicial. Su aporte amable fue = imprescindible=20 para la elaboraci=F3n del presente trabajo. Gracias mil por su = buen=20 humor.

A=20 Rebeca L=F3pez, funcionaria de la Biblioteca de la Corte Suprema = de=20 Justicia. Por su = cortes=EDa y=20 ayuda en el pr=E9stamo de libros.

Dedicatoria: =20

A=20 mi madre, fuente de bien y amor absoluto.

=CDNDICE =20

T=CDTULO I.- =BFQU=C9 ES = EL A.D.N. Y SU=20 IMPORTANCIA PARA LA INVESTIGACI=D3N FORENSE. =20

CAP=CDTULO=20 1.- ENFOQUE BIOQU=CDMICO.

=20 Secci=F3n a) REFERENCIAS HIST=D3RICAS =20

=20 Secci=F3n b) DESCUBRIMIENTO DEL A.D.N =

=20 Secci=F3n c) CARACTER=CDSTICAS GENERALES DEL = A.D.N =20

=20 Secci=F3n d) PROLEG=D3MENOS A LAS PRUEBAS CON = A.D.N =20

CAP=CDTULO=20 2.- ENFOQUE FORENSE.

=20 Secci=F3n a) PRINCIPIOS B=C1SICOS DE = INMUNOHEMATOLOGIA =20

=20 Secci=F3n b) LOS ASESINATOS DEL SENDERO- INGLATERRA. PRIMER = CASO EN=20 LA HISTORIA FORENSE EN SER RESUELTO MEDIANTE EL PERFIL = GEN=C9TICO =20 =20

=20 Secci=F3n c) JEFFREYS, MINISAT=C9LITES Y LA PRUEBA = RFLP =20

=20 Secci=F3n d) MULLIS- REACCI=D3N EN CADENA DE LA POLIMERASA = (0 T=C9CNICA=20 DEL P.C.R

&nbs= p; =20 d.1-CONCEPTO DE P.C.R.

&nbs= p; =20 d.2-MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS NECESARIOS PARA LA = T=C9CNICA DEL=20 P.C.R.

&nbs= p; =20 d.3-MEJORAS Y NUEVAS APLICACIONES DE LA T=C9CNICA = P.C.R. =20

&nbs= p; =20 d.4-INTERPRETACI=D3N B=C1SICA DE LAS PRUEBAS = P.C.R. =20

=20 Secci=F3n e) AN=C1LISIS COMPARATIVO ENTRE LAS PRUEBAS = R.F.L.P. DE=20 JEFFREYS Y EL P.C.R. DE MULLIS

=20 Secci=F3n f) EL CASO O.J. SIMPSON

=20

T=CDTULO=20 II.- ESTAD=CDSTICAS COSTARRICENSE EN PRUEBAS DE = P.C.R. =20

CAP=CDTULO=20 1.- AN=C1LISIS ESTAD=CDSTICOS DE LAS PRUEBAS DE P.C.R. EN CASOS DE = PATERNIDAD=20 Y CASOS PENALES DURANTE 1998 Y 1999.

=20 Secci=F3n a) PRUEBAS DE P.C.R. EN LA UNIDAD DE A.D.N. = SECCI=D3N DE=20 BIOQU=CDMICA DEL DEPARTAMENTO DE LABORATORIO DE CIENCIAS FORENSES = DEL=20 ORGANISMO DE INVESTIGACI=D3N JUDICIAL DURANTE EL A=D1O DE = 1999 =20

=20 Secci=F3n b) PRUEBAS DE P.C.R. SOLICITADAS POR EL PODER = JUDICIAL AL=20 CENTRO DE INVESTIGACI=D3N EN BIOLOG=CDA MOLECULAR Y CELULAR DE LA = UNIVERSIDAD=20 DE COSTA RICA DURANTE 1998

CONCLUSIONES =20

BIBLIOGRAF=CDA=20 CONSULTADA

ANEXO=20

INTRODUCCION =20

=20 Hace muchos siglos, Her=E1clito de Efeso, conocido = tambi=E9n como=20 Her=E1clito =93El Oscuro=94, pronunci=F3 su frase lapidaria: panta = rhei. Efectivamente, todo = cambia. No=20 s=F3lo no nos ba=F1amos dos veces en el mismo r=EDo, -sino que = adem=E1s cuando nos=20 ba=F1amos- nuestro cuerpo no es necesariamente el mismo. Es un hecho cient=EDfico = que cada=20 siete a=F1os, nuestras c=E9lulas han sido renovadas por completo. = =20

=20 La Biolog=EDa Molecular, espec=EDficamente las t=E9cnicas = que involucran=20 el A.D.N., han supuesto una verdadera revoluci=F3n dentro de la=20 criminal=EDstica, convirti=E9ndose en una herramienta = indispensable para el=20 esclarecimiento de hechos delictivos (mayoritariamente homicidios = y=20 violaciones). Contribuyen adem=E1s, para el establecimiento de la = filiaci=F3n=20 en disputas de paternidad (en algunos casos de excepci=F3n, = incluso de=20 maternidad) y abre las puertas a los complejos temas de la clonaci=F3n = y la=20 ingenieria gen=E9tica.

=20 Si en su momento, la oveja Dolly, supuso una conmoci=F3n; = podemos=20 figurarnos lo que significar=E1 el primer caso documentado de = clonaci=F3n=20 humana. Hay quienes afirman que los gobiernos del primer mundo = conspiran=20 para ocultar el hecho de que ya se est=E1 experimentando en ese = derrotero.=20 Los bebes probetas de finales de la d=E9cada de los 70`s, son = ahora=20 saludables y an=F3nimos ciudadanos que anticiparon en su momento, = la=20 tecnolog=EDa por venir. =20

Es de suponer que este movimiento = cient=EDfico,=20 conllevar=E1 una revisi=F3n axiol=F3gica igualmente importante. El = tema es=20 delicado, los angloparlantes tienen una frase para delinear el = punto:=20 Playing God , es decir jugar a ser Dios. En todo caso, las = implicaciones=20 que la ciencia = aplicada al=20 A.D.N. sugiere, exceden el contenido tem=E1tico de este ensayo, = pero no por=20 ello deja de intrigarnos y claro est=E1...asombrarnos, aunque con = no poca=20 preocupaci=F3n. =20

El =E1cido desoxirribonucle=EDco o = A.D.N. es un=20 =93ingrediente=94 b=E1sico en la continuaci=F3n de las especies y = en la estructura=20 de todos los seres vivos. = Si=20 bien, la creaci=F3n y el universo entero (seres vivientes o no) = compartimos=20 los cuatro elementos estructurales, el famoso C.H.O.N. sea, = carbono,=20 hidr=F3geno ox=EDgeno y nitr=F3geno; el A.D.N. presente en el = n=FAcleo y las=20 mitocondrias de todas las c=E9lulas, a la par del A.R.N. o =E1cido = ribonucle=EDco, aunque participa de ese cuarteto, es lo que hace = posible la=20 vida y la preserva. =20

Haciendo un s=EDmil cibern=E9tico un = tanto burdo,=20 diremos que el cuerpo de los animales, plantas y el homo sapiens = es el=20 =93hardware=94 y el A.D.N. es el =93software=94 que sintetiza = incluso la=20 constituci=F3n del CPU.

Este trabajo pretende =96bajo el = apercibimiento=20 que es reproductivo de datos logrados por otros- acercar al = abogado =96=20 verdadero =93dummie=94 de las ciencias exactas- y a los legos en = general, a un=20 mundo desconocido y fascinante: la biolog=EDa molecular. Para ello = utilizaremos un lenguaje llano pero estricto en t=E9rminos y = conceptos. =20 Incluiremos algunas observaciones personales y hasta breves = an=E9cdotas que despertar=E1n un poco de hilaridad en el =E1rido = terreno de lo=20 que nos es desconocido.

Nuestro viaje inicia con Darwin y = sus=20 vivencias en las islas Gal=E1pagos, pasando por Mendel y la = iron=EDa de no=20 conocer en vida el =E9xito y la fortuna (aunque en principio no le = interesaban, en raz=F3n de su condici=F3n de cl=E9rigo). = Exploraremos los=20 aportes de Watson y Crick, cuyo modelo helicoidal del A.D.N. a=FAn = nos=20 acompa=F1a. Sin menoscabar la importancia del eminente Sutton y = el dan=E9s Johannsen, quien = en 1909=20 acu=F1=F3 el t=E9rmino =93gen=94.

Asimismo, haremos un pormenorizado = estudio de=20 la estructura del A.D.N. permitiendo as=ED, un adecuado y = necesario=20 proleg=F3meno a las pruebas cient=EDficas que nos = ocupan. =20

Luego, bajo una perspectiva forense, = enunciaremos principios b=E1sicos de inmunohematolog=EDa, sin los = cuales=20 correr=EDamos el riesgo de estropear las muestras que permiten la = extracci=F3n=20 del A.D.N. Particularmente rescataremos la importancia de los qu=EDmicos = anticoagulantes que deben=20 aplicarse a las muestras de sangre.

Rese=F1aremos el primer caso = resuelto con la=20 valiosa t=E9cnica RFLP del Doctor Alec Jeffreys, genetista = ingl=E9s que cambi=F3=20 para siempre la criminal=EDstica, mientras busca otro objetivo de = otra=20 naturaleza. As=ED, se logr=F3 la captura del =93asesino del = sendero=94 en=20 Narborough (Gran Breta=F1a) en los a=F1os ochentas. =20

Profundizaremos en la t=E9cnica = pre-citada y=20 avanzaremos hacia la t=E9cnica m=E1s empleada en la actualidad: el = P.C.R. o=20 Reacci=F3n en cadena de la Polimerasa, del Dr. Mullis en Estados=20 Unidos. No = obviaremos el=20 detalle de esta maravilla forense y la compararemos con la prueba = de=20 Jeffreys. Tambi=E9n puntualizaremos los avances, mejoras y nuevas=20 aplicaciones del P.C.R. en la gen=E9tica y la medicina. =

A manera de ilustraci=F3n, = criticaremos el caso=20 de O.J. Simpson, quiz=E1 uno de los m=E1s pol=E9micos y = publicitados de la=20 historia. Veremos = como la=20 prueba cient=EDfica del = A.D.N.=20 cedi=F3 ante el sistema de jueces en conciencia. =20

En el T=EDtulo II, = aportaremos datos=20 (con su representaci=F3n gr=E1fica), de la estad=EDstica = costarricense en=20 pruebas de P.C.R. durante los a=F1os de 1998 y 1999. Para este prop=F3sito = hemos contado=20 con la valios=EDsima colaboraci=F3n de las Doctoras Sandra Silva y = Marta=20 Espinoza, del Centro de Biolog=EDa Molecular y Celular de la = Universidad de=20 Costa Rica y la Unidad de A.D.N. secci=F3n de Bioqu=EDmica del = Departamento de=20 Laboratorio de Ciencias Forenses del Organismo de Investigaci=F3n = Judicial,=20 respectivamente.

Finalmente expondremos conclusiones=20 pragm=E1ticas y viables de f=E1cil constataci=F3n, discutiendo a = la vez aspectos=20 especulativos que la ciencia dirimir=E1 a su tiempo.

Preguntarnos acerca del A.D.N. es=20 cuestionarnos quienes somos, es revelar la identidad oculta que = nos=20 determina fisiol=F3gicamente (en el fenotipo y genotipo). La = importancia de=20 estas interrogantes resulta impactante, esperamos poder suplir un = poco de=20 conocimiento a tan importante t=F3pico. =

La=20 hip=F3tesis de este trabajo, consiste en aseverar nuestra = creencia, de que, la = predisposici=F3n a las=20 conductas desviadas, especialmente la delincuencia, no se = transmite=20 gen=E9ticamente mediante factores hereditarios de progenitores a = hijos y=20 dem=E1s descendientes. O al menos, pensamos- como hip=F3tesis = subsidiaria-,=20 que no ser=EDa el =FAnico factor =20 que explique la etiolog=EDa del delito, ya que la nurtura, = para el=20 punto en ex=E1men, es m=E1s determinante que el perfil gen=E9tico = de un=20 individuo.=20

TITULO I.- =BFQU=C9 ES=20 EL A.D.N.? Y SU IMPORTANCIA PARA LA INVESTIGACION = FORENSE =20

CAP=CDTULO=20 1.- ENFOQUE BIOQU=CDMICO =20 =20

Secci=F3n=20 a) REFERENCIAS HIST=D3RICAS

=20 Con=20 la publicaci=F3n de El origen de las Especies en 1859, Charles = Darwin=20 admiti=F3 que las leyes que rigen la herencia, en su mayor parte = son=20 desconocidas, ya que nadie pod=EDa decir por qu=E9 la misma = particularidad en=20 diferentes especies, a veces es heredada y otras no.=20

=20 Durante muchos a=F1os esta ausencia de una teor=EDa que = explicara=20 certeramente los = fen=F3menos de=20 la herencia, fue un obst=E1culo evidente para los incipientes = naturalistas=20 europeos. Desde 1865, Gregor Mendel -un monge austr=EDaco nacido = en=20 Heizendorff, Moravia en 1822- sintetiz=F3 m=E1s de de diez a=F1os = de trabajo=20 experimental en conceptos agrupados en un par de leyes, a partir = de las=20 cuales se pod=EDan fundar las bases del estudio cient=EDfico de la = herencia.=20 Con una eficiente preparaci=F3n en ciencias naturales y = matem=E1ticas,=20 materias en las que ejerci=F3 incluso la docencia, en junio de = 1954, Mendel=20 inici=F3 sus investigaciones. =20 Cultiv=F3 plantas ornamentales, incluyendo los ch=EDcharos = de color,=20 seleccion=F3 dos clases diferentes de ch=EDcharos o guisantes = pertenecientes a=20 variedades puras, capaces de replicar los mismos rasgos despu=E9s = de varias=20 autofertilizaciones y los cruz=F3, descubriendo as=ED que los = productos del=20 cruzamiento no son necesariamente intermedios entre las especies = paternas.=20 A partir de all=ED, se concentr=F3 en los caracteres que se = transmit=EDan de=20 generaci=F3n en generaci=F3n y que no daban origen a formas = intermedias.=20 Mendel not=F3 que cada caracter se comportaba como una unidad, = pasando sin=20 modificaci=F3n a trav=E9s de individuos de la primera generaci=F3n = de manera=20 independiente, comenz=F3 a hacer un recuento de repeticiones de = ciertas=20 relaciones de descendencia y as=ED =93...Al finalizar = estad=EDsticamente sus=20 resultados, Mendel se dio cuenta que cada uno de los progenitores = de las=20 plantas de ch=EDcharo le transmit=EDa a sus descendientes = =FAnicamente la mitad=20 de su patrimonio hereditario, es decir, cada car=E1cter... se = hereda=20 independientemente, pero adem=E1s est=E1 determinado por dos = componentes, uno=20 de origen paterno y otro materno; si los dos son diferentes, = entonces uno=20 de ellos es dominante y el otro recesivo. Los misterios de la = herencia=20 pod=EDan comenzar a ser descifrados=94.(1) =20

=20 As=ED, las conclusiones de Mendel llegaron a ser los cinco = postulados=20 b=E1sicos de la gen=E9tica cl=E1sica:

1- = Los=20 caracteres hereditarios est=E1n controlados por unidades discretas = e=20 indivisibles que pasan inalterados de generaci=F3n en = generaci=F3n.=20

2- = Cada=20 caracter es producido por dos factores hereditarios, de ah=ED que = en un gen=20 pueda existir en varias formas alternas, varias versiones que dan = origen a=20 las diferencias en el color de la piel, el pelo, ojos, etc.=20

3- = Cada=20 c=E9lula de los organismos sexuales contiene una doble dosis de = genes una de=20 cada padre. Cada progenitor contribuye solamente con uno de los = factores=20 hereditarios de cada gameto.

4- = Cuando=20 dos factores hereditarios llamados =93alelos=94, son contrastantes = o=20 diferentes y est=E1n presentes en un organismo, uno de ellos se = har=E1=20 evidente en la primera generaci=F3n por lo que se le llama el = alelo=20 dominante y al otro recesivo, pero =E9ste =FAltimo puede = detectarse en los=20 cruces posteriores.

5- = Los=20 genes se ordenan linealmente y en grupos que se heredan juntos: = grupos=20 ligados, y el n=FAmero de estos grupos corresponde en cada = organismo, al=20 n=FAmero de cromososomas en el n=FAcleo de la c=E9lula. Cuando los = gametos se=20 unen en la fertilizaci=F3n, los dos factores hereditarios se = re=FAnen y de=20 nuevo existen en pares. &nbs= p; =20 =20

Cuando=20 present=F3 por primera vez dos reportes de sus experimentos ante = la Sociedad=20 de Historia Natural, la trascendencia de sus descubrimientos no = fue=20 valorada. La explicaci=F3n de esta apat=EDa la sugiere Avers =93A causa de la falta de = informaci=F3n=20 biol=F3gica en aquella =E9poca sobre los eventos nucleares de la = divisi=F3n y=20 reproducci=F3n, el trabajo de Mendel permaneci=F3 en la = oscuridad=94.(2) Mendel abandon=F3 = pronto sus=20 investigaciones al ser nombrado abad (abate, rector) del convento, = muri=F3=20 16 a=F1os despu=E9s, el 6 de enero de 1884, a los 62 a=F1os.=20

=20 Formalmente, se dice que la gen=E9tica nace con el = =93redescubrimiento=94=20 de la obra de Mendel -que de manera independiente- iniciaron en = 1900, Hugo=20 de Vries en Holanda, Carl Correns en Alemania y Erick Tschemark de = Austria. Estos = cient=EDficos=20 basaron sus propios trabajos en la =93piedra angular=94 de la obra = de=20 Mendel. =20

En 1903, Walter S. Sutton = formul=F3=20 la Teor=EDa Cromos=F3mica de la Herencia, donde propon=EDa que =93los cromosomas eran los = portadores=20 f=EDsicos de las unidades de la herencia y que estas unidades eran = transmitidas por los cromosomas=94.(3) Despu=E9s surgi=F3 el = llamado grupo de=20 los =93drosofilistas=94, entre ellos, Thomas Hunt Morgan, = Sturtevant, Bridges=20 y M=FCller, quienes utilizaron en sus experimentos de cruzamiento = la mosca=20 de la fruta, del g=E9nero Drosophilia, insecto que se reproduce en = laboratorio con suma facilidad y tiene una corta vida. Estos = estudios=20 demostraron que cada grupo de genes ligados que se heredan juntos correspond=EDan a = un=20 cromosoma. Adem=E1s, se descubri=F3 que existen ciertas = aberraciones=20 cromos=F3micas que son mutaciones que afectan en forma grosera al = genoma=20 (constituci=F3n cromos=F3mica de un organismo) y que = frecuentemente son=20 letales o causan enfermedades gen=E9ticas. El aporte de los = drosofilistas es=20 que permiten una concepci=F3n m=E1s precisa que deriv=F3 en los = estudios de las=20 levaduras, que propon=EDa que cada gen contiene la informaci=F3n = para=20 sintetizar una enzima. =20

=20

Secci=F3n=20 b) DESCUBRIMIENTO DEL A.D.N.

Con=20 los experimentos utilizando dos cepas de bacterias de la=20 neumon=EDa,Griffith, Avery, MacLeod y MacCarty, determinaron que = el A.D.N.=20 era el material gen=E9tico que imparte vida. As=ED, =93...Los m=EDnimos comunes = denominadores=20 de la vida son los =E1cidos nucleicos: A.R.N. en unos cuantos = virus y A.D.N.=20 en pr=E1cticamente todos los otros organismos. El A.D.N. es la = chispa vital,=20 la mol=E9cula maestra que hace que todas las dem=E1s mol=E9culas = de los seres=20 vivos sean lo que son.=94(4) En todos los seres vivos = (con la=20 excepci=F3n de algunos virus) el genoma est=E1 constituido por = =E1cido=20 desoxirribonucleico (A.D.N.) .

En=20 1951, el bi=F3logo = James Watson=20 se uni=F3 al equipo de trabajo del laboratorio del f=EDsico = Francis Crick,=20 para la fecha, la biolog=EDa se centralizaba en el gen y su = control sobre=20 las transformaciones qu=EDmicas que ocurren en el interior de la = c=E9lula. A=20 los cient=EDficos reci=E9n citados les interesaba averiguar la = disposici=F3n de=20 =E1tomos en la mol=E9cula de A.D.N., el resultado de su = investigaci=F3n los=20 condujo a un modelo tridimensional que representa fielmente la = mol=E9cula de=20 A.D.N. en un escala incrementada; sobre la base de datos de = difracci=F3n,=20 f=EDsicoqu=EDmicos y una enorme dosis de intuici=F3n. En 1962, Watson y = Crick recibieron el Premio = Nobel de=20 Medicina y Fisiolog=EDa por el descubrimiento de la estructura = molecular del=20 =E1cido desoxirribonucleico, hito que contribuye al entendimiento = de los=20 procesos b=E1sicos de la vida.

Este=20 modelo ayud=F3 =93a resolver el misterio de = la=20 arquitectura de esta mol=E9cula omnipotente y de tantas funciones, = y a=20 explicar como el A.D.N. transmite la informaci=F3n hereditaria y = c=F3mo esta=20 pasa de c=E9lula a c=E9lula y de organismo a organismo=94 (5)=20

El=20 Doctor londinense Maurice H.F.Wilkins, utiliz=F3 los rayos X para = estudiar=20 muestras puras de A.D.N. y as=ED se obtuvieron =93fotograf=EDas=94 = de la=20 arquitectura molecular, donde se identificaron grupos de =E1tomos=20 ordenadamente repetidos o dispuestos en la estructura retorcida = del=20 A.D.N. =20 Posteriores estudios revelaron que el A.D.N. es una de las=20 mol=E9culas m=E1s grandes conocidas, con millones de =E1tomos y = con unidades=20 submoleculares de seis tipos: el az=FAcar denominada desoxirribosa = (de cinco=20 carbonos y enlazada al az=FAcar del nucle=F3tido adyacente por el = grupo=20 fosfato), el radical fosfato (con un =E1tomo de f=F3sforo y cuatro = de=20 ox=EDgeno), y las otras cuatro son las denominadas =93bases = nitrogenadas=94:=20 purina y pir=EDmidinas (adenina, guanina, timina y = citosina). =20

Watson=20 y Crick crearon una escala, cuyos lados son dos tiras enroscadas = una=20 alrededor de la otra, que contienen en forma alternativa unidades = de=20 az=FAcar y fosfato. Los pelda=F1os de la escala est=E1n ligados a = unidades de=20 az=FAcar en cada tira. = Cada uno=20 de estos pelda=F1os consiste en un par de bases: A y T o C y = G; no hay otra = combinaci=F3n pues s=F3lo=20 as=ED, se obtienen pelda=F1os de igual tama=F1o. Cada una de estas = parejas se unen=20 a trav=E9s de puentes de hidr=F3geno: dos en el par A =96 T y tres = en el par C =96=20 G. =20

De=20 forma que =93la = concepci=F3n de la=20 doble h=E9lice inici=F3 inmediatamente una profunda revoluci=F3n = en la forma de=20 analizar datos por parte de los genetistas. El gen dej=F3 de ser = una entidad=20 misteriosa, cuyo comportamiento s=F3lo se pod=EDa investigar con = experimentos=20 de hibridaci=F3n; se convirti=F3 muy pronto en cambio, en un = objeto molecular=20 real.=94 (6)

=20 Otro gran avance que produjo el modelo Watson-Crick es que = sugiere=20 un mecanismo muy sencillo de duplicaci=F3n. Ya que el A.D.N. tiene = la forma=20 de una doble h=E9lice y puede escindirse por el medio, a lo largo, = y cada=20 mitad puede construir una mol=E9cula completa. La mol=E9cula = primero se=20 desenrrolla y los puentes de hidr=F3geno que unen los pares de = bases se=20 rompen ordenadamente, abri=E9ndose por el centro cada pelda=F1o. = Entonces,=20 cada base en la media hebra puede encontrar pareja dentro de las = bases=20 libres en el citoplasma. Las unidades nuevas ocupan los viejos = lugares con=20 el orden de la escala original, y as=ED se tiene que cada mitad de = A.D.N.=20 original constituy=F3 una nueva mitad complementaria. En 1958, Messelson y = Stahl probaron=20 esto a trav=E9s de un experimento con bacterias cultivadas en un = medio=20 alimenticio enriquecido con nitr=F3geno pesado. =20

En=20 1959 se confiri=F3 al doctor Arthur Kornberg y a su colega Severo = Ochoa el=20 Premio Nobel, ya que lograron sintetizar A.R.N. partiendo del = A.D.N. en un=20 tubo de ensayo, ello contituy=F3- en criterio de Edward Frankl- = uno de los=20 experimentos m=E1s = emocionantes=20 a favor de la teor=EDa de la duplicaci=F3n del A.D.N. por = escisi=F3n y=20 reconstituci=F3n de escalas. =20 Se afirma que =93El=20 descubrimiento de que los =E1cidos nucleicos son un componente = esencial de=20 la materia viva, fue llevado a cabo por Frederich Miescher, en = el curso de=20 sus investigaciones acerca de los componentes qu=EDmicos del = n=FAcleo=20 celular...=94 (7) =20

=20 Sin embargo, transcurrieron cerca de ochenta a=F1os desde = el=20 descubrimiento hasta que el papel fundamental en la transmisi=F3n = de los=20 caracteres hereditarios, le fuera atribuido al A.D.N. Wilhein Roux = lanz=F3=20 la idea de que el = n=FAclo=20 celular y m=E1s concretamente los cromosomas constitu=EDan el = material base de=20 la herencia.

Secci=F3n c) = CARACTER=CDSTICAS GENERALES=20 DEL A.D.N.

El=20 A.D.N. es una mol=E9cula que determina la naturaleza fundamental = de toda la=20 vida, se encuentra en cada una de las c=E9lulas del cuerpo y sus = iniciales=20 resumen su nombre qu=EDmico: =E1cido desoxirribonucleico. En su = estructura,=20 as=ED como en la del A.R.N. participan o est=E1n presentes las = primidinas y=20 las purinas. Adem=E1s como su nombre lo indica reside en el = n=FAcleo de la=20 c=E9lula, aunque es posible extraer A.D.N. mitocondrial, y en = general =93...ejerce un control = doble sobre la=20 vida de un organismo. Dirige el metabolismo, las actividades = incesantes=20 que mantienen funcionando la maquinaria del cuerpo. Determina = asimismo, la=20 herencia, la transmisi=F3n de rasgos que hace perdurar la especie = durante=20 centenares, miles y a veces hasta millones de a=F1os.=94(8) =20

El=20 =E1cido desoxirribunucleico es un gran pol=EDmero compuesto de = mon=F3meros=20 llamados nucle=F3tidos, los cuales se agrupan en series. Cada nuecle=F3tido, = est=E1 formado por=20 un az=FAcar 2! Desoxirribosa que contiene una base nitrogenada = unida al=20 carbono 1! y un grupo fosfato unido al carbono 5!. La base nitrogenada = puede ser=20 timina, citosina, adenina, o guanina; las dos primeras son bases=20 pirid=EDminicas y las dos =FAltimas son purinas. Los = nuecle=F3tidos se unen unos=20 con otros por medio del grupo fosfato, formando enlaces = fosfodi=E9ster,=20 donde el frupo fosfato se enlaza al ox=EDgeno que est=E1 unido al = carbono 3!=20 Del siguiente nucle=F3tido. De=20 esta forma, los polinucle=F3tidos tienen un extremo con un grupo = trifosfato=20 libre unido al carbono 5! del az=FAcar desoxirribosa. =

La=20 mayor=EDa de las veces, el A.D.N. se encuentra en forma de doble = hebra. Se dice que las hebras = son=20 complementarias, pues cada base nucleot=EDdica se une = espec=EDficamente con=20 otra base por medio de puentes de hidr=F3geno, siguiendo las = reglas de=20 apareamiento de Watson y Crick, =20 As=ED la Timina se une con la adenina a trav=E9s de dos = puentes de=20 hidr=F3geno, mientras que la citocina se une a la guanina por = medio de tres=20 puentes de hidr=F3geno. Las hebras complementarias del A.D.N. son=20 antiparalelas, puesto que la terminal 5! De una hebre corresponde = a la=20 terminal 3! De la otra. El A.D.N. en su estructura terciaria es=20 helicoidal. La = h=E9lice consta=20 de diez bases complementadas por vuelta y en general, la h=E9lice = gira en=20 direcci=F3n de las manecillas del reloj, pero se han descubierto = diversas=20 formas cristalinas del A.D.N.

El=20 A.R.N. es , al igual que el A.D.N. un polinucle=F3tido; pero con = dos=20 diferencias fundamentales con respecto a la estructura primaria = del=20 A.D.N. la primera = diferencia=20 es que el az=FAcar es una ribosa y no una desoxirribosa. La segunda diferencia es = que, en=20 vez de la timina, contiene otra pirimidina llamada uracilo.=20

Resulta=20 vital, puntualizar el concepto de genes, a fin de entender el = cometido del=20 presente trabajo, para ello nos basamos en el trabajo de la = ingeniera=20 qu=EDmica Tatiana Rodr=EDguez Gamboa, as=ED =93Los genes son segmentos = de A.D.N.=20 cuya longitud oscila aproximadamente entre los 75 nucle=F3tidos y = los 40 mil=20 nt. Los genes = contienen la=20 informaci=F3n biol=F3gica que permite que se cumplan todas las = funciones del=20 organismo. Cada gen = contiene,=20 en su secuencia de nucle=F3tidos, la informaci=F3n necesaria para = sintetizar=20 una prote=EDna. = Estos dictan no=20 s=F3lo la qu=EDmica de la c=E9lula a trav=E9s de las enzimas; sino = que tambi=E9n=20 dictan la arquitectura biol=F3gica a trav=E9s de las prote=EDnas = estructurales,=20 por ejemplo. De = hecho, la=20 informaci=F3n biol=F3gica est=E1 contenida en una de las dos = hebras de la doble=20 h=E9lice. Este = fragmento se=20 llama hebra anti- codificante.

En=20 c=E9lulas de organismos superiores, los genes son transportados = por n=FAmeros=20 peque=F1os de cromosomas. = Estos=20 est=E1n formados por prote=EDnas y A.D.N. Cada mol=E9cula de = A.D.N.. contiene=20 muchos genes. Por = ejemplo el=20 ser humano contiene 23 tipos de cromosomas, cada uno de los cuales = tiene=20 una copia. Cada cromosoma contiene aproximadamente 1740 genes en=20 promedio. Algunos = genes son=20 discontinuos, es decir que est=E1n fragmentados a lo largo de la = cadena de=20 A.D.N. Los fragmentos del gen que codifican para la s=EDntesis de = una=20 prote=EDna se llaman exones y los fragmentos que no codifican son = los=20 intrones.

Los=20 genes pueden existir en dos formas alternativas, las cuales se = llaman=20 alelos. Se dice que un organismo es heterocigota cuando los alelos = son=20 diferentes y homocigota cuando los alelos son iguales. Un organismo hereda un = alelo de la=20 madre y otro del padre. Los alelos pueden ser dominantes o = recesivos. Generalmente, en un = heterocigota=20 solo el alelo dominante es que contribuye al fenotipo. El alelo dominante es la = versi=F3n=20 funcional del gen, es decir, es la =FAnica que puede expresarse = para formar=20 un producto gen=E9tico funcional. =20 El alelo recesivo contiene una mutaci=F3n que destruye la = informaci=F3n=20 biol=F3gica que lleva el gen.

Existen casos donde el alelo = domina de=20 forma parcial y la forma heterocigota del fenotipo desarrollado, = es=20 intermedio entre las dos formas homocigotas. Tambi=E9n puede = existir la=20 codominancia, donde ambos alelos est=E1n activos en el estado=20 heterocigota. = Finalmente los=20 genes pueden existir en m=E1s de dos form=E1s al=E9licas, pese a = que cada=20 individuo contiene solamente dos.(9) =20

Los=20 cromosomas constituyen el material base de la herencia ya que = contienen el=20 material hereditario de un organismo, es decir, el material = transmitido de=20 progenitor al descendiente y es responsable de la gran semejanza = entre=20 ellos. Ya a principios de este siglo, el cromosoma fue = representado como=20 un agregado de millares de unidades hereditarias, los genes unidos = como=20 como perlas de un collar. Un gen tiene una posici=F3n definida en = el=20 cromosoma y determina le herencia de alg=FAn rasgo respec=EDfico: = color del=20 pelo, de la piel, tipo sangu=EDneo, etc. Los cromosomas se = heredan de ambos=20 padres, de ah=ED que el ni=F1o (a) presente caracter=EDsticas de = A.D.N. de=20 ambos, los = fragmentos=20 gen=E9ticos pueden ser constatados como de origen materno o = paterno, en=20 cambio hay otros propios del descendiente. Podemos afirmar que =93Entonces, la mitad del = material=20 gen=E9tico de toda persona proviene de cada uno de sus = progenitores,=20 veintitr=E9s cromosomas que se derivan del espermatozoide del = padre, m=E1s=20 veintitr=E9s cromosomas que se derivan del =F3vulo de la madre, es = por esto=20 que se dice que los seres humanos son organismos = diploides.=94(10) Cada especie tiene un = n=FAmero=20 espec=EDfico de cromosomas, de los 46 cromosomas humanos (23 = pares), 22=20 pares son autos=F3micos y un par es de cromosomas sexuales. El = A.D.N. de=20 cada ser vivo contiene mensajes espec=EDficos para la c=E9lula, = sea=20 instrucciones para la s=EDntesis de prote=EDnas; pues el A.D.N. = suministrar=E1 a=20 la c=E9lula las instrucciones para colocar cada amino=E1cido en el = lugar=20 debido en la cadena prote=EDnica. Toda enzima es una prote=EDna y = como tal, se=20 produce bajo el control del A.D.N.

Vemos=20 entonces que los =E1cidos nucleicos como el A.D.N. son mol=E9culas = que=20 transmiten informaci=F3n gen=E9tica de una c=E9lula a sus = descendientes, y=20 tambi=E9n llevan informaciones entre ciertos componentes = celulares. Se puede=20 se=F1alar en general, que los =E1cidos nucleicos est=E1n = constituidos por la=20 polimeraci=F3n de unidades llamadas =93nucle=F3tidos=94. Se reconocen dos tipos = de =E1cido=20 nucleico: el desorribonucleico o A.D.N. y el ribonucleico o A.R.N. = Estos=20 =E1cidos =93son mol=E9culas = formacionales que=20 controlan los procesos b=E1sicos del metabolismo celular, la = s=EDntesis de=20 macromol=E9culas, la diferenciaci=F3n celular y la transmisi=F3n = del patrimonio=20 gen=E9tico de una c=E9lula a sus descendientes.=94(11) As=ED pues el A.D.N. es = el=20 responsable del almacenamiento y transmisi=F3n de la informaci=F3n = gewn=E9tica,=20 y se encuentra en los cromosomas, y en peque=F1as cantidades en = las=20 mitocondrias y en los cloroplastos. =20 En general, el orden de enlace de los nucle=F3tidos provee = un casi=20 infinito n=FAmero de posibilidades de secuencias, lo que hace que = el A.D.N.=20 de cada persona muestre patronos individuales que no se = repiten.(12)=20

La=20 variaci=F3n que existe se debe a tres fen=F3menos: 1-La mezcla de = un juego de=20 los cromosomas de dos individuos =FAnicos. 2- Repartici=F3n al = azar de los=20 veinitr=E9s pares de cromosomas en la meiosis del padre y la = madre. 3-=20 Recombinaci=F3n mei=F3tica, que mezcla las secuencias en cada = cromosoma.(13)=20

=93En resumen, el DNA = director de la=20 c=E9lula, controla todas las actividades celulares desde su = despacho de=20 ejecutivo en el n=FAcleo. Los planos de fabricaci=F3n de millares = de=20 prote=EDnas est=E1n = en otros=20 tantos genes que constituyen =96dir=EDamos- los archivos de la = c=E9lula: los=20 cromososmas... el DNA no hace todo el trabajo solo. Crea = asistentes y les=20 atribuye responsabilidades. =20 Estos asistentes son las diversas clases de mol=E9culas de = RNA. Un=20 grupo lo constituyen las mol=E9culas de RNA mensajero, copias = qu=EDmicas de=20 genes que contienen el plano para una prote=EDna espec=EDfica = . Estas mol=E9culas salen = al=20 citoplasma y =93dicen=94 a los ribosomas , factor=EDas de = prote=EDnas, que=20 prote=EDnas han de hacer. Otra creaci=F3n del DNA es el RNA de = trasnferencia,=20 cuyas mol=E9culas est=E1n constitu=EDdas para captar amino=E1cidos = sueltos=20 espec=EDficos y llevarlos al lugar debido de la l=EDnea de = montaje. Conforme los diversos = amino=E1cidos=20 ocupan sus lugares, van formando una cadena prote=EDnica, ordenada = seg=FAn las=20 instrucciones qu=EDmicas contenidas en el gene. La prote=EDna = reci=E9n formada=20 se desprende de la l=EDnea de montaje y y la maquinaria = ribos=F3mica queda=20 dispuesta para fabricar m=E1s de la misma prote=EDna, o acaso para = recibir=20 otro conjunto de instrucciones...=94 (14) =20

Es=20 importante acotar que =93Cada unidad=20 de informaci=F3n hereditaria se identifica con el nombre de gen, = t=E9rmino=20 propuesto por el bot=E1nico dan=E9s Johannsen en 1909 para = reemplazar a los=20 diversos vocablos con los que se hasta ese moemnto se denominaba a = los=20 elementos hereditarios. =20

Cada gen est=E1 compuesto = por =E1cido=20 desoxirribunucleico que es el material que constituye la = estructura de los=20 cromosomas y est=E1, por ende, considerado el veh=EDculo de la = herencia=20 biol=F3gica; se lo identifica internacionalmente con las siglas = ADN o DNA=20 (correspondiente a su denominaci=F3n en idioma ingl=E9s)...(15) Como bien se=F1ala Maris = Mart=EDnez,=20 citando al Breve Glosario de Biotecnolog=EDa de la Unesco, se = puede definir=20 a los cromosomas, como las estructuras cuneiformes situadas en el = n=FAcleo=20 de una c=E9lula que almacenan y transmiten informaci=F3n = gen=E9tica; es la=20 estructura f=EDsica portadora de los genes. Los cromosomas est=E1n = compuestos=20 esencialmente de ADN y prote=EDna y contienen la mayor parte del = ADN de la=20 c=E9lula. Cada especie tiene un n=FAmero caracter=EDstico de = cromosomas.=20

Como=20 ya hab=EDamos indicado, los cromosomas fueron vinculados por = primera vez a=20 la herencia por Walter Sutton (citologista) en 1903, adem=E1s =93Cada uno de los genes = ocupa un lugar=20 espec=EDfico en el cromosoma y origina un producto = caracter=EDstico que define=20 cada alternativa de un car=E1cter diferencial.=94 (16) Resulta esencial, de = previo a=20 continuar con nuestro estudio, proceder a definir t=E9rminos = gen=E9ticos=20 b=E1sicos, para ello, utilizaremos la obra de Stella Maris = Mart=EDnez. =93La palabra genotipo se = refiere a la=20 constituci=F3n gen=E9tica de un individuo, esto es, a la clase de = genes que=20 ese individuo ha heredado para un rasgo en particular. El aspecto = o=20 apariencia de tal individuo con relaci=F3n a ese rasgo se conoce = con el=20 nombre de fenotipo. Ambos t=E9rminos deben tambi=E9n su creaci=F3n = a=20 Johannsen.

La=20 posibilidad de variaci=F3n de un organismo existe gracias a un = cierto grado=20 de maleabilidad del genoma (conjunto de la informaci=F3n = gen=E9tica contenida=20 en el cromosoma), que permite el dise=F1o de nuevas combinaciones = de genes=20 mediante dos mecanismos principales: la recombinaci=F3n gen=E9tica = y la=20 mutaci=F3n. La = recombinaci=F3n=20 gen=E9tica es el proceso de intercambio de informaci=F3n = hereditaria entre dos=20 organismos independientes, que resulta en la producci=F3n de = nuevas=20 combinaciones de = genes y=20 facilita la aparici=F3n de organismos variantes dentro de una = especie=20 determinada. La importancia de =20 este mecanismo en el desarrollo evolutivo es tal que en las = especies m=E1s avanzadas = se=20 impone obligatoriamente en los ciclos de reproducci=F3n sexual, ya = que los=20 gametos (c=E9lulas sexuales) contienen s=F3lo un miembro de cada = pareja de=20 genes (que en las restantes c=E9lulas del organismo se presentan=20 indefectiblemente por pares), aportando entonces s=F3lo un gen = para cada uno=20 de los pares que tendr=E1 el cigoto. =20 Recibe el nombre de cigoto la c=E9lula que se forma al = fusionarse la=20 c=E9lula sexual femenina (=F3vulo) con la masculina = (espermatozoide); la=20 entidad resultante de esta fusi=F3n es una c=E9lula con cuarenta y = seis=20 cromosomas, de los cuales veintitr=E9s fueron aportados por el = gameto=20 masculino y los veintitr=E9s restantes por el femenino, y mantiene = ese=20 nombre durante las primeras divisiones celulares.=20

La mutaci=F3n, por su parte, = es un=20 mecanismo mediante el cual un gen sufre un cambio repentino del = que=20 resulta una forma nueva=94.(17) =20

Conviene, de = previo a=20 continuar con nuestra investigaci=F3n, profundizar un poco m=E1s = en la=20 conceptualizaci=F3n de las prote=EDnas y su relaci=F3n con la = llamada expresi=F3n=20 gen=E9tica. Las prote=EDnas son pol=EDmeros con menos de mil = unidades de=20 longitud, hechos de amino=E1cidos unidos entre s=ED a trav=E9s de = enlaces=20 pept=EDdicos. Hay veinte amino=E1cidos diferentes. El orden de = amino=E1cidos en la=20 prote=EDna, esta directamente relacionado con el orden de = nucle=F3tidos en el=20 gen. El proceso = mediante el=20 cual, la informaci=F3n biol=F3gica contenida en el gen, se lleva a = la c=E9lula=20 se llama Expresi=F3n Gen=E9tica. =20 Por medio del proceso llamado transcripci=F3n, se sintetiza = una=20 mol=E9cula de =E1cido ribonucl=E9ico (A.R.N.) , cuya secuencia es = complementaria=20 a la hebra codificante del gen que actua como molde. En el proceso de = Traducci=F3n, la=20 mol=E9cula de A.R.N. = llamada=20 A.R.N. mensajero (como ya vimos con antelaci=F3n) o A.R.N.m se transmite = al A.R.N.=20 de transferencia o A.R.N. t, que es la mol=E9cula que convierte la = secuencia=20 de nucle=F3tidos en una secuencia de amino=E1cidos. =20

Secci=F3n=20 d) PROLEGOMENOS A LAS PRUEBAS CON A.D.N. =

Es=20 posible =93desnaturalizar=94 las mol=E9culas de A.D.N. al = exponerla a ciertas=20 condiciones como una temperatura elevada, un ph (grado de acidez) = alto o=20 bajo, entre otros. Estas alteraciones destruyen los enlaces o = puentes de=20 hidr=F3geno que unen los dos filamentos de la estructura = helicoidal; por lo=20 que se modifican propiedades espec=EDficas del A.D.N.=20 desnaturaliz=E1ndolo. = Una de=20 las caracter=EDsticas importantes de la doble h=E9lice de A.D.N. = (seg=FAn=20 Charlotte Avers) es la relativa facilidad con que las hebras que = la=20 componen se separan y reasocian. Cuando el A.D.N. nativo (no=20 desnaturalizado) es = expuesto=20 a temperaturas o a la titulaci=F3n con =E1cido o alcalis las dos = hebras se=20 desenrrollan y = separan.=20

De=20 forma que la desnaturalizaci=F3n consiste en romper la estructura = de doble=20 cadena del A.D.N. para obtener dos cadenas simples. Estas cadenas = libres=20 pueden unirse total o parcialmente a cualquier cadena que tenga = una=20 secuencia complementaria exacta, por ejemplo una sonda, este fue = el punto=20 de partida de la prueba del P.C.R.

El=20 hecho de que hay secuencias que se repiten muchas veces a lo largo = de los=20 dos filamentos de A.D.N. ha sido la base para caracterizar=20 individuos. Entre = estas=20 secuencias, encontramos algunas cuya funci=F3n se conoce y a los = que=20 llamamos genes. Obviamente, las regiones de mayor inter=E9s son = las=20 altamente variables, pues =93...la=20 posibilidad de que dos individuos no relacionados presenten = exactamente=20 los mismos poliformismos, en cuanto a localizaci=F3n y frecuencia, = en su=20 A.D.N., es extremadamente remota. =20 De ah=ED surge la idea de que al comparar los poliformismos = de una=20 persona con los poliformismos de otra, puede dar como resultado = una=20 =93huella gen=E9tica=94 diferente para cada una de ellas=94. = (18)

Estas regiones = son=20 localizadas en el genoma humano, a trav=E9s de sondas A.D.N. Juan = Antonio=20 Gisbert Calbuig, las define como fragmentos de D.N.A. que = contienen=20 secuencias de nucle=F3tidos, complementarias a secuencias = presenten en loci=20 espec=EDficos del genoma humano. =20

El=20 A.D.N. humano est=E1 formado por tres mil millones de pares de = bases, a=20 veces, en ciertas zonas los pares se repiten con una secuencia y = longitud=20 variable para cada persona. De ah=ED que se hable de huellas = gen=E9ticas=20 (Genetic fingerprints) que distinguen a cada individuo.=20

CAPITULO 2.- = ENFOQUE=20 FORENSE = =20

Secci=F3n = a) PRINCIPIOS B=C1SICOS DE=20 INMUNOHEMATOLOGIA

Antes de internarnos en = el enfoque=20 forense propuesto, es menester tener una noci=F3n razonada de la=20 inmunohematolog=EDa, la cual es definida, en el material del = Laboratorio de=20 Ciminal=EDstica de la U.N.E.D.(19),=20 como la ciencia que estudia los principios aplicados a la=20 investigaci=F3n de los ant=EDgenos presentes en las c=E9lulas = sangu=EDneas y de=20 los anticuerpos presentes en el organismo en condiciones normales = o de=20 enfermedad. Una ant=EDgeno es una sustancia extra=F1a = (generalmente una=20 prote=EDna) que al introducirse al cuerpo suscita la producci=F3n = de=20 anticuerpos. Un = anticuerpo,=20 asimismo, es tambi=E9n de naturaleza prot=E9ica y se produce como = reacci=F3n a=20 una sustancia extra=F1a que penetra =20 en la sangre y en los tejidos. La inmunohemtolog=EDa se = inicia en=20 1901 cuando Karl Landsteiner descubre los ant=EDgenos y anicuerpos = que=20 integran los grupos sangu=EDneos del sistema ABO; desde entonces = se han=20 descubierto otros marcadores gen=E9ticos.

Para = esclarecer casos=20 criminal=EDsticos o de paternidad discutida se realizan varios = tipos de=20 an=E1lisis de marcadores gen=E9ticos. Los marcadores gen=E9ticos = son cada una de=20 las caracter=EDsticas que se analizan a partir de una muestra de = sangre en=20 el laboratorio y que proporcionan informaci=F3n detallada del = perfil=20 gen=E9tico de cada individuo. =20 Un marcador gen=E9tico, como se indic=F3 es un rasgo que se = utiliza=20 para identificar a una persona haciendo uso de su sangre, piel, = hueso,=20 etc. Est=E1 determinado gen=E9ticamente, y se transmite de acuerdo = con las=20 leyes mendelianas de la herencia ya expuestas. Adem=E1s, pueden = ser=20 determinados con certeza en el laboratorio, a=FAn de infantes de = muy corta=20 edad. Los = marcadores=20 gen=E9ticos han sido ampliamente usados en estudios de = tranfusi=F3n, pruebas=20 de paternidad, investigaci=F3n antropol=F3gica, identificaci=F3n = forense,=20 predici=F3n de personalidad, etc.

La = inmunohematolog=EDa=20 se ha convertido as=ED, en una gran herramienta de trabajo para el = cient=EDfico forense en la identificaci=F3n de individuos, ya que = permite=20 hacer comparaciones de muestras de sangre halladas en la escena = del crimen=20 con la sangre de de v=EDctimas e imputados involucrados en el = hecho=20 punible. Por tanto, = el Juez y=20 el investigador que participan en el levantamiento de un cuerpo y = en la=20 toma de indicios en la escena de un crimen, se relacionan de una = manera=20 directa con la Inmunohematolog=EDa y los marcadores gen=E9ticos = que se van a=20 estudiar en las muestras de secreciones recogidas sobre el = cad=E1ver y sus=20 alrededores.

Mediante la = prueba de=20 marcadores gen=E9ticos se puede lograr una identificaci=F3n de los = individuos. El Juez = y las=20 partes, deben conocer los anticoagulantes que se utilizan en el=20 laboratorio forense, porque se le podr=EDa interrogar acerca de = este tipo de=20 informaci=F3n en alg=FAn momento procesal, adem=E1s que le = servir=E1 de mucho=20 provecho para sus labores. Conviene recordar que el personal = hospitalario=20 deber=E1 enviar alguna muestra de sangre proveniente de alg=FAn = imputado o=20 v=EDctima al laboratorio forense para ser comparada con las = muestras=20 encontradas en los indicios recogidos de la escena de un crimen. = La=20 coagulaci=F3n de la sangre ocurre normalmente cuando el tejido = sufre da=F1o=20 vascular, esto desencadena la activaci=F3n de algunas sustancias = qu=EDmicas,=20 cuya funci=F3n es evitar que contin=FAe el sangrado. Al extraer una muestra = de sangre=20 debe evitarse su coagulaci=F3n utilizando compuestos qu=EDmicos: = los=20 anticoagulantes.

=BFpor qu=E9 = debe evitarse la=20 coagulaci=F3n de la sangre? Si=20 la sangre no se coagula se facilitan los an=E1lisis de marcadores = gen=E9ticos=20 que se llevan a cabo en el laboratorio forense: as=ED permanecen = las c=E9lulas=20 sangu=EDneas, eritocitos o gl=F3bulos rojos, los gl=F3bulos = blancos o leucocitos=20 y las plaquetas, libres en el plasma o fase l=EDquida de la sangre = y no=20 atrapadas en el co=E1gulo. = Esta=20 condici=F3n permite hacer una suspensi=F3n para an=E1lisis de = grupos sangu=EDneos=20 en pruebas de paternidad o para una extracci=F3n de A.D.N. m=E1s=20 efectiva.

Los eritrocitos = son las=20 c=E9lulas sangu=EDneas m=E1s numerosas, su funci=F3n es acarrear = el ox=EDgeno a=20 trav=E9s del organismo. = Los=20 leucocitos son las c=E9lulas que se encargan de destruir los = agentes=20 invasores que entran al cuerpo y por =FAltimo, las plaquetas son = las c=E9lulas=20 m=E1s peque=F1as que participan en el proceso de coagulaci=F3n. La = sangre=20 anticoagulada se usar=E1 para analizar grupos sangu=EDneos, para = hacer manchas=20 de sangre en tela de algod=F3n est=E9ril que se almacena a menos = 20=BA=20 Cent=EDgrados, hasta su uso o para extraer A.D.N. directamente de = los=20 gl=F3bulos blancos. Una vez extra=EDda se somete a alta velocidad = haci=E9ndola=20 girar en una centr=EDfuga o se deja reposar por varias horas, de = esta manera=20 las c=E9lulas se separan en Plasma y plaquetas, leucocitos y = eritrocitos=20 (esto significa que se ha utilizado un anticoagulante).

Si al tomar = muestras de=20 sangre no se usan anticoagulantes, o si se derrama por causa de = una=20 herida, al centrigugarse o quedar en reposo, se separa suero y = coagulo.=20 Algunos de los anticoagulantes que se utilizan en la actualidad en = el=20 laboratorio forense son EDTA y ACIDO CITRICO-CITRATO-DEXTROSA o=20 A.C.D.

El EDTA = (etilendiamino=20 tetrac=E9tico) es el anticoagulante m=E1s usado y se emplea en una = concentraci=F3n de 1 a 2 mg/ml de sangre. Previene la = coagulaci=F3n al remover=20 el calcio del plasma por precipitaci=F3n. Se usa en la toma de = muestras para=20 an=E1lisis de A.D.N., en pruebas de paternidad y en casos = criminal=EDsticos,=20 para determinar marcadores gen=E9ticos eritroc=EDticos e = isoenzimas en=20 muestras de sangre fresca.

El =E1cido=20 c=EDtrico-citrato-dextrosa (A.C.D.) act=FAa secuestrando el i=F3n = calcio, lo que=20 inhibe la coagulaci=F3n de la sangre. =20 Permite la conservaci=F3n de los g=F3bulos rojos por un = lapso de 21=20 d=EDas. Se utiliza como anticoagulante de preferencia en = an=E1lisis de A.D.N.=20 La sangre recolecta en la escena del crimen , ya sea del suelo o = de las=20 paredes, se recoge en forma est=E9ril, =20 sin anticoagulantes, pues ya est=E1 coagulada y se coloca = en un tubo=20 de ensayo tambi=E9n est=E9ril. Seg=FAn entrevista efectuada a la = Dra. Marta=20 Espinoza,(20) para tomar las muestras se utilizan =93torundas=94 = una especie=20 de aplicadores con punta de algod=F3n similares a los usados para = la=20 limpieza del o=EDdo, s=F3lo que son m=E1s largos y totalmente = est=E9riles. Si hay=20 una mancha de sangre en la piel, pero est=E1 seca, la Dra. = Espinoza se=F1ala=20 que la muestra se toma rasp=E1ndola. =20 Adem=E1s indic=F3 que trat=E1ndose de restos =F3seos, su = aptitud para=20 pruebas de A.D.N. es variable seg=FAn las condiciones ambientales, = pero en=20 espacios abiertos, su utilidad m=E1xima es de unos veinte = a=F1os. Como nota curiosa, = agregamos que=20 la citada especialista nos indic=F3 que el semen se conserva mejor = en tela,=20 para muestra un bot=F3n (el vestido manchado de semen que guard=F3 = M=F3nica=20 Lewinsky y motiv=F3 la confesi=F3n p=FAblica del Presidente Bill = Clinton). Es=20 importante rescatar de esta entrevista, que el secuenciador = autom=E1tico=20 para pruebas de P.C.R. (que estudiaremos posteriormente) vale=20 aproximadamente 44 millones de colones (en 1999) y el Poder = Judicial no=20 dispone de uno, =FAnicamente est=E1 disponible en la Ciudadela de = la=20 Investigaci=F3n de la Universidad de Costa Rica. =20

Secci=F3n b) LOS ASESINATOS DEL SENDERO =96 = INGLATERRA. PRIMER=20 CASO EN LA HISTORIA FORENSE EN SER RESUELTO MEDIANTE EL PERFIL=20 GEN=C9TICO.

En el tranquilo = pueblo de=20 Narborough (Reino Unido), de poco m=E1s de seis mil habitantes, la = ma=F1ana=20 del 22 de noviembre de 1983 fue macabra, se encontr=F3 el cuerpo = sin vida y=20 desnudo de una jovencita de 15 a=F1os de edad, Lynda Rosemarie = Mann, al lado=20 de un sendero cercano a la poblaci=F3n. El forense determin=F3 que = fue=20 estrangulada con su propia bufanda y posteriormente fue ultrajada=20 sexualmente, del cuerpo de la v=EDctima se extrajo semen que = revel=F3 que el=20 ofensor ten=EDa sangre tipo A positivo (el cual tienen un 10 % de = la=20 poblaci=F3n). Como = es de=20 esperar, se desat=F3 una verdadera cacer=EDa sin resultados = efectivos, en un=20 primer momento se pens=F3 que el autor pod=EDa ser alg=FAn = paciente de un=20 hospital psiqui=E1trico situado muy cerca del sitio del hallazgo, = pero esa=20 hip=F3tesis fue descartada r=E1pidamente. Aqu=ED, conviene = recordar que no se=20 ha demostrado cient=EDficamente que los enfermos mentales tengan = una mayor=20 disposici=F3n a la delincuencia que los mentalmente sanos. Cuando ya la = tranquilidad parec=EDa=20 volver a Narborough, el 31 de julio de 1986, Dawn Ashworth fue = encontrada=20 muerta en otro camino, en un lugar cercano ad=F3nde ocurri=F3 el = primer=20 asesinato. Ambas v=EDctimas, eran de la misma localidad, eran = cauc=E1sicas, de=20 15 a=F1os de edad, hab=EDan muerto estranguladas, hab=EDan sido = violadas y=20 adem=E1s asist=EDan al mismo colegio. El semen encontrado en la = menor,=20 indicaba tambi=E9n que la sangre del violador era A positivo. Un = asesino en=20 serie acechaba a la comunidad.

Sin embargo, a = diferencia,=20 de Lynda Mann, Dawn Ashworth fue violada antes de morir, seg=FAn = determin=F3=20 el pat=F3logo forense y opus=F3 una mayor resistencia. A juzgar = por las=20 lesiones de su cuerpo, se dijo que debi=F3 haber sufrido mucho de = previo a=20 fenecer. La polic=EDa intensific=F3 su b=FAsqueda y arrest=F3 a un joven = de 17 a=F1os,=20 Richard Buckland, como principal sospechoso, adem=E1s lo = incriminaba el=20 hecho de que exist=EDan pruebas que intimidaba a las jovencitas = del pueblo=20 con insinuaciones indecorosas, tras largas horas de = interrogatorio,=20 Buchland acept=F3 haber matado a Dawn Ashworth, pero dijo no haber = asesinado=20 a Lynda Mann, por los detalles que brind=F3 a la polic=EDa acerca = de la=20 posici=F3n del cuerpo y otros aspectos no conocidos por la prensa, = las=20 autoridades no ten=EDan la menor duda que hab=EDan atrapado al=20 homicida.

Muy cerca de = ah=ED, en la=20 Universidad de Leicester, a tan s=F3lo diez kil=F3metros de la = escena del=20 crimen, el Doctor Alec Jeffreys, connotado genetista, hab=EDa = descubierto=20 accidentalmente una t=E9cnica que ser=EDa conocida popularmente = como=20 =93dactilograf=EDa gen=E9tica=94. Como bien indic=F3 el = cientifico, su hallazgo fue=20 un caso t=EDpico de eureka. Jeffreys apunt=F3 que buscaba en un = grupo de genes=20 responsables de la producci=F3n de prote=EDna de =93mioglobina=94 = que llevan el=20 ox=EDgeno a los m=FAsculos. Su intenci=F3n era desarrollar marcas = gen=E9ticas que=20 identificaran los genes espec=EDficos, estudiaba el fen=F3meno = conocido como=20 =93regiones hipervariables=94. La hipervariabilidad se evidencia = en el n=FAmero=20 de repeticiones de ciertas secuencias entre individuos. Por ejemplo un = minisat=E9lite dado=20 de unos treinta y dos pares de bases, podr=EDa aparecer 28 veces = en el=20 A.D.N. de una persona, 22 en otra y 19 veces en una tercera = persona. Fue este el aspecto el = que revel=F3=20 a Jeffreys algo que hab=EDan eludidio otros investigadores. =C9l = puntualiz=F3=20 que estas regiones minisat=E9licas ten=EDan un potencial para = identificaci=F3n=20 m=E1s grande que cualquier otro marcador gen=E9tico = convencional. Los cient=EDficos = forenses=20 calificaron este descubrimiento como el mayor avance en su campo = desde que=20 se inici=F3 la = identificaci=F3n a=20 trav=E9s de huellas digitales. =20 Por eso, nos parece muy extra=F1o, que el Dr. Jeffreys, no = fuera=20 galardonado con el premio Nobel en qu=EDmica o = medicina.

A pesar, de que = la t=E9cnica=20 de Jeffreys, Polimorfismo de la Restituci=F3n de la Uni=F3n de = Fragmentos o=20 RFLP, no se hab=EDa utilizado nunca en un caso criminal (solamente = en un=20 caso de paternidad y en una investigaci=F3n relacionada a un = problema=20 migratorio), la comisi=F3n investigadora de los homicidios, = decidi=F3=20 confirmar la autor=EDa de Buckland mediante la llamada huella del = perfil=20 gen=E9tico, comparando la sangre del sospechoso con las muestras = de semen=20 encontradas en los cuerpos de las v=EDctimas, a trav=E9s de la = prueba del=20 A.D.N. de Jeffreys, el RFLP.

En esta primera = etapa, el=20 RFLP consist=EDa en aislar separadamente el A.D.N. contenido en = las muestras=20 (sangre del sospechoso y semen encontrado) =93cortando=94 el = A.D.N. con=20 enzimas de restricci=F3n (prote=EDnas), una vez obtenido el A.D.N. = de las=20 muestras, se someti=F3 a un proceso de electrof=F3resis (campo = el=E9ctrico),=20 exponi=E9ndolas a tinta radioactiva y coloc=E1ndolas sobre un gel=20 electrofor=E9tico. A trav=E9s de una luz ultravioleta se v=EDo = claramente como=20 la corriente el=E9ctrica =20 arrastr=F3 los fragmentos cargados negativamente por el gel = hasta el=20 polo positivo de la cubeta. Los fragmentos separados son = visualizados en=20 una pel=EDcula de rayos X llamados autoradiograma, que se asemeja = a un=20 c=F3digo de barras (de los que tienen los productos y son le=EDdos = en un=20 =93lector=94 electr=F3nico en un supermercado) mostrando el car=E1cter gen=E9tico = =FAnico de un=20 individuo.

Se concluy=F3 de = la prueba,=20 que las dos j=F3venes fueron violadas y quiz=E1 asesinadas por un = mismo=20 hombre, pero ese hombre no era Richard Buckland. La noticia del = resultado=20 estremeci=F3 a la polic=EDa, quienes esc=E9pticos ante la novedad = del peritaje,=20 practicaron nuevamente la prueba esta vez con cient=EDficios de la = oficina=20 del forense. Los = resultados=20 fueron id=E9nticos a los obtenidos inicialmente por el Dr. = Jeffreys. La fiscal=EDa concluy=F3 = que Buckland=20 tuvo que haber encontrado primero el cuerpo de Dawn Ashworth, ya = que sab=EDa=20 detalles que demandaban observaci=F3n presencial directa del = cuerpo de la=20 menor. Buckland = explic=F3=20 despu=E9s, que confes=F3 debido a la =93presi=F3n policial=94. = Richard Buckland se=20 convirti=F3 en la primera persona en el mundo en ser exonerado de = una=20 acusaci=F3n criminal, concretamente de homicidio, gracias a la = prueba de=20 A.D.N. descubierta por Alec Jeffreys.

Sin embargo, un = homicida=20 serial estaba oculto, las autoridades se preguntaban =BFcu=E1ndo volver=EDa a = matar?. Se desat=F3 lo que se = dio en llamar=20 una =93Cacer=EDa A.D.N.=94 o =93Pesquiza Gen=E9tica=94, dada la = baja densidad=20 demogr=E1fica de la zona, se divulg=F3 por todos los medios de = comunicaci=F3n la=20 realizaci=F3n del experimento, era un plan atrevido y sin paralelo = hasta=20 entonces.

Se pidi=F3 = voluntariamente a=20 los hombres residentes en Narborough y en un pueblo cercano, que = oscilaran=20 entre los 13 y los 33 a=F1os que suministraran una muestra de = sangre y=20 saliva. M=E1s de 5000 hombres colaboraron, al fin y al cabo era = una forma de=20 ser exculpados de los hechos y as=ED evitar las sospechas de sus = vecinos.=20 Las pruebas de A.D.N. s=F3lo se practicaron a aquellos que = ten=EDan el mismo=20 tipo de sangre que el asesino, es decir, A positivo (10 % del = total). Los resultados fueron=20 desalentadores, ninguno de los donantes coincid=EDa con el perfil = gen=E9tico=20 del autor de los cr=EDmenes.

La Providencia = permiti=F3 que=20 lo que parec=EDa una superficial conversaci=F3n en un bar, se = transformara en=20 la clave para dar con el paradero del autor de los hechos. Una mujer joven que se = encontraba=20 en el Pub =93The Claredon=94 en Narborough puso atenci=F3n a la = pl=E1tica de un=20 grupo de hombres, uno de ellos de apellido Kelly afirm=F3 que se = hab=EDa hecho=20 tomar la prueba de sangre, a nombre de otra persona, un tal Colin=20 Pitchfork, ya que =E9ste le indic=F3 que ten=EDa asuntos con la = polic=EDa y no=20 quer=EDa aparecer personalmente. =20 A la mujer aquello no le pareci=F3 com=FAn, =BFpor qu=E9 = alguien quisiera=20 pasar desapercibido en las pruebas de A.D.N.? se comunic=F3 con = los=20 investigadores y les narr=F3 lo escuchado. Colin Pitchfork fue = arrestado=20 casi de inmediato, y confes=F3 r=E1pidamente ser el autor de los = asesinatos de=20 Lynda Mann y Dawn Ashworth, los especialistas aseveraron que la = inusitada=20 confesi=F3n de Pitchfork se debi=F3 a que =E9ste cre=EDa en la = efectividad de la=20 prueba del A.D.N. y ten=EDa la convicci=F3n que el d=EDa que le = practicaran la=20 prueba, estar=EDa acabado. Al parecer, Kelly acept=F3 hacerse la = prueba por=20 Pitchfork pero no sab=EDa que =E9ste era el autor de los = asesinatos, se=20 tomaron fotos en una m=E1quina fotogr=E1fica autom=E1tica y en el = pasaporte=20 aut=E9ntico de Pitchfork, insertaron la foto de Kelly. La alteraci=F3n no fue = percibida por=20 los encargados de practicar las pruebas. Kelly fue condenado a 18 = meses de=20 prisi=F3n por los delitos de conspiraci=F3n y obstrucci=F3n de la = justicia, pero=20 se le suspendi=F3 la pena por ser primario y no tener conocimiento = de la=20 autor=EDa de Pitchfork.

Para sorpresa de = nadie, el=20 resultado de la prueba practicada a Pitchfork, encajaba = perfectamente como=20 un guante con el perfil gen=E9tico obtenido del semen de la escena = del=20 crimen. Colin = Pitchfork, a la=20 saz=F3n de 27 a=F1os, casado y con dos hijos, se convirti=F3 en la = primera=20 persona en el mundo en ser condenado el 22 de enero de 1988, por = el perfil=20 de su A.D.N. Su esposa indic=F3, no tener la menor idea de las = actividades=20 il=EDcitas de su marido, como suele suceder. Los familiares son = los =FAltimos=20 en percatarse de que viven con un asesino en serie. Tema por = dem=E1s=20 interesante y que excede los objetivos de nuestra investigaci=F3n. = La=20 criminal=EDstica ten=EDa ahora una nueva y poderosa herramienta, = que en=20 palabras de su autor, el Doctor Jeffreys =93hab=EDa sacado los = dientes=94 para=20 atrapar al responsable de los homicidios. Alec Jeffreys fue = nombrado=20 caballero por la Reina Isabel II de Inglaterra en 1994, por = servicios a la=20 ciencia y la tecnolog=EDa. Sin embargo, el premio Nobel nunca = llegar=EDa como=20 ya indicamos, ese honor le correspondi=F3 al Dr. Mullis =96como = veremos=20 despu=E9s- por el descubrimiento de la t=E9cnica de = investigaci=F3n del A.D.N.=20 llamada PCR o Reacci=F3n en cadena de (o con) Polimerasa. =20

Secci=F3n c) JEFFREYS , MINISATELITES Y LA PRUEBA = RFLP.=20

En 1985, en=20 Inglaterra, el Doctor Alec Jeffreys afirm=F3 que las regiones=20 =93minisat=E9lites=94 hipervariables dispersas en el genoma humano = presentan=20 fragmentos de restricci=F3n de longitud polim=F3rfica (RFLP=B4s) = por las=20 diferencias al=E9licas en el n=FAmero de repeticiones en serie = contenidas en=20 un fragmento de A.D.N. Entonces, una de las posibilidades de = identificar a=20 una persona con el A.D.N. se basa, precisamente, en el estudio de = esos=20 fragmentos de restricci=F3n de longitud polim=F3rfica (RFLP=B4s). = La longitud de=20 los RFLP=B4s es variable, debido a una sustituci=F3n en la = secuencia de bases,=20 o bien a una inserci=F3n o delecci=F3n de un n=FAmero determinado = de pares de=20 bases. La utilidad de algunas sondas A.D.N. es que detectan = variaciones de=20 secuencia entre diferentes individuos, lo que se traduce en = diferencias en=20 la longitud de fragmentos y, por consiguiente, en la migraci=F3n = de las=20 bandas. Este tipo = de=20 polimorfismos se denomina normalmente RFLP, Como se indic=F3, los = RFLP=B4s se=20 originan por mutaciones, delecciones o inserciones de uno o m=E1s=20 nucle=F3tidos, o adiciones o delecciones de secuencias de A.D.N. = repetidas=20 en t=E1ndem. Este = =FAltimo tipo=20 de variaci=F3n es el m=E1s interesante y es conocido como VNTR = (Variable=20 Number of Tandem Repeats). Los loci VNTR se encuentran en las = denominadas=20 regiones =93minisat=E9lites=94, t=E9rmino usado para describir = secuencias cortas=20 repetidas en t=E1ndem y repartidas por todo el genoma. Aunque = existen=20 centenares de estos polimorfismos, se tiende a utilizar aquellos = en los=20 que existen sondas bien comprobadas y de ser posible, de f=E1cil = adquisici=F3n=20 y que, adem=E1s posean un m=E1ximo grado de polimorfismo y datos = poblacionales=20 correctos. Con el = empleo de=20 sondas espec=EDficas, que son fragmentos de A.D.N., cuya secuencia = nucleot=EDdica conocemos y es completamentaria para un = misisat=E9lite=20 determinado, se puede lograr tras la hibridacci=F3n, la = identificaci=F3n,=20 empleando un revelador adecuado. =20

Como ya = indicamos, el=20 t=E9rmino huella digital gen=E9tica fue acu=F1ado por Alec = Jeffreys, a efectos=20 de simplificar la exposici=F3n para los no especialistas, = principalmente=20 abogados, diremos que =93Este=20 investigador utiliz=F3 sondas multilocus y obtuvo un patr=F3n de = bandas de=20 A.D.N. (=C4cido Desoxirribonucleico) semejante al patr=F3n = magn=E9tico que traen=20 los productos comerciales. = Como ese patr=F3n es caracter=EDstico de cada persona se le = llam=F3=20 huella digital gen=E9tica en concordancia con la huella dactilar, = que=20 tambi=E9n es =FAnica. Sin embargo las sondas multilocus (MLP) = cedieron pronto=20 el lugar a las sondas unilocus (SLP) que dan solo un patr=F3n de 2 = bandas=20 por personas. = Aunque las=20 sondas m=FAltiples tienen una mayor capacidad de exclusi=F3n, su = producci=F3n e=20 interpretaci=F3n de los resultados presentan varias dificultades = que no se=20 dan con sondas simples. Una mezcla de 2-4 de =E9stas nos dan = resultados m=E1s=20 claros y equivalentes a una sonda m=FAltiple. La gran capacidad de = exclusi=F3n=20 e inclusive de inclusi=F3n de esta nueva tecnolog=EDa se debe a = que existen=20 zonas (locus) en el ADN que son muy variables. Estas se = denominan, una vez=20 cortadas enzim=E1ticamente, RFLPs (Restriction Fragment Lenght=20 Polymorphism). Su = longitud=20 est=E1 dada por el mayor o menor n=FAmero de veces que una unidad = b=E1sica de=20 ADN se repite dentro de ese locus: VNTR (Variable Number of Tandem = Repeats). Cada uno de los tama=F1os de ese fragmento constituye un = alelo del=20 locus. =20

Para efectos = forenses,=20 el locus ser=E1 m=E1s importante cuanto m=E1s alelos tenga. En la actualidad se = trabajan=20 algunos loci que tienen entre 20 y 30 alelos, tales como el = MCT-118=20 (D1580) y el APO B. Recientemente, un locus relacionado con los = ant=EDgenos=20 H.L.A. (DRB) se describi=F3 con 60 alelos. Como heredamos un gen = materno y=20 otro paterno, el n=FAmero posible de patrones de dos bandas se = hace enorme y=20 cuando se combinan las capacidades de exclusi=F3n de dos o m=E1s = locus=20 podr=EDamos tener una probabilidad tal que, estad=EDsticamente, no = alcanzar=EDa=20 la poblaci=F3n de un pa=EDs o inclusive la poblaci=F3n mundial, = para encontrar=20 otro individuo semejante. Es por ello que tenemos un gran empe=F1o = en=20 utilizar rutinariamente esa tecnolog=EDa en Costa Rica, la cual se = puede=20 utilizar con sangre fresca (paternidades), y manchas de sangre, = semen o=20 cabellos foliculados generalmente hallados en homicidios y=20 violaciones..=94(21) Conviene incorporar en = este=20 apartado, lo rese=F1ado por Carmen P=E9rez =93Una buena pista es la que = aporta una=20 informaci=F3n =FAtil para el desarrollo de la investigaci=F3n, = aunque a veces=20 =FAnicamente conduzca a otra. Desde el punto de vista de los = an=E1lisis del=20 DNA, la mejor materia es la sangre, porque suele contener una = mayor=20 cantidad de c=E9lulas y, por tanto, m=E1s material gen=E9tico para = analizar.=20 Adem=E1s la extracci=F3n del DNA resulta m=E1s f=E1cil. =

El semen = tambi=E9n=20 contiene una gran cantidad de c=E9lulas y es bastante estable, = pero en el=20 caso de tomas vaginales a partir de la v=EDctima suele estar m=E1s = contaminado=20 que la sangre, porque tiene restos de sus secreciones vaginales y = hay que=20 separarlas previamente para estudiarlo.

Un cabello = se conserva=20 bien durante mucho tiempo, pero tambi=E9n acostumbra a estar m=E1s = contaminado, ya que suele tener material gen=E9tico de otros = individuos.=20 Algo parecido ocurre con la saliva: impregnada en la goma = adherente de los=20 sobres y sellos se puede conservar en perfecto estado durante = a=F1os, pero=20 s=F3lo es =FAtil si contiene c=E9lulas de la mucosa epitelial de = la=20 boca.=94(22)=20

A = continuaci=F3n,=20 delimitaremos conceptos b=E1sicos que nos ayudar=E1n a obtener una = mayor=20 comprensi=F3n del contenido de la exposici=F3n, para ello nos = basaremos en el=20 art=EDculo del Dr. Rafael Mar=EDn Rojas, cuya cita ya fue = indicada, el Dr.=20 Mar=EDn es adem=E1s Master en Ciencias y a la fecha de la = publicaci=F3n fung=EDa=20 como Jefe de Laboratorio Cl=EDnico del Hospital San Juan de Dios = en San=20 Jos=E9, Costa Rica. =20

Locus: fracci=F3n = del A.D.N.=20 que contiene una caracter=EDstica. =20

VNTR: = repetici=F3n=20 secuencial de una unidad b=E1sica de A.D.N. dentro del = RFLP. =20

Enzima de = Restricci=F3n:=20 mol=E9cula org=E1nica = capaz de cortar=20 la mol=E9cula del A.D.N. en peque=F1os pedazos o RFLPs por sus dos = extremos o=20 sitios de restricci=F3n. Es una verdadera =93tijera = gen=E9tica=94. =20

Enzima = Polimerasa:=20 hace=20 lo contrario, une nucle=F3tidos para formar un pedazo de A.D.N.=20 (oligonucle=F3tido), tomando como punto de partida un = =93primer=94=20 (cebo o semilla). =20

Sonda:=20 equivalente=20 de un =93primer=94 grande. = Su=20 misi=F3n es encontrar RFLPs dentro de los miles que produce una = enzima de=20 restricci=F3n. Pegado a ella lleva un sistema que sirve para = revelar la=20 presencia de ese RFLP e indicar su posici=F3n relativa. Este = sistema es=20 necesario porque el A.D.N. del RFLP est=E1 en poca concentraci=F3n = y no es=20 posible visualizarlo directamente, se usa el sistema revelador de = la=20 sonda: radiactivo, qu=EDmico o fotoqu=EDmico. =20

Agarosa:=20 sustancia=20 natural, gelificante, extra=EDda de algas, semejante a la = gelatina. En ella ponemos la = muestra de=20 A.D.N. diregida con la enzima (RFLPs) para separar por=20 electroforesis. =20

Electroforesis:=20 t=E9cnica=20 para someter a un = campo=20 el=E9ctrico la muestra que est=E1 en la agarosa. Los RFLPs m=E1s = livianos=20 migrar=E1n, dentro del gel, m=E1s r=E1pidamente que los m=E1s = grandes o pesados y=20 todos ocupar=E1n una posici=F3n caracter=EDstica que ser=E1 = visualizada y=20 fotografiada. =20

Transferir:=20 (Southern Blotting) pasar=20 los RFLPs, despu=E9s de la electroforesis, de la agarosa a un = medio s=F3lido:=20 nylon o celulosa. = En este=20 nuevo soporte es donde se hibridiza con la sonda marcada. =20

Revelar:=20 poner a funcionar el sistema indicador, transportado por la sonda, = para=20 que indique el sitio exacto donde quedaron las bandas = =93paternas=94 y=20 =93maternas=94de los RFLPs analizados. =20 Una vez revelados son fotografiados para su estudio = comparativo,=20 con las otras muestras. =20

Concluye=20 el Dr. Mar=EDn Rojas que =93En resumen,=20 la t=E9cnica de la huella gen=E9tica consiste en extraer el ADN de = la muestra:=20 sangre fresca, tejido, mancha de sangre, manchas de semen o = fol=EDculo=20 piloso. La extracci=F3n se realiza mediante un m=E9todo org=E1nico = o uno=20 inorg=E1nico. Despu=E9s de extra=EDdo el ADN se somete a la = digesti=F3n con al=20 enzima de restricci=F3n.

Una=20 vez realizada la digesti=F3n, los RFLPs se separan mediante = electroforesis=20 en agarosa, despu=E9s de lo cual se realiza la transferencia a = mebranas de=20 nylon. Ya en este = soporte se=20 lleva a cabo la hibridizaci=F3n con la sonda marcada para = finalizar con el=20 revelado y la fotograf=EDa.

Como=20 podr=E1 verse, la metodolog=EDa es larga y bastante complicada por = lo que se=20 han dise=F1ado t=E9cnicas =20 alternativas a la huella gen=E9tica. La m=E1s utilizada el = PCR:=20 Reacci=F3n en cadena de la polimerasa. Mediante ella hacemos = millones de=20 copias del VNTR que nos interesa (con primers y polimerasa) y con = esa=20 cantidad podemos visualizar directamente la posici=F3n del = fragmento del=20 DNA, despu=E9s de la electroforesis, sin necesidad de = transferencia ni=20 sondeo. Con ello, la metodolog=EDa se reduce a a una etapa de = extracci=F3n, a=20 otra de copiado y a la separaci=F3n por electroforesis. Por =FAltimo = fotografiamos las=20 posiciones relativas de los RFLPs directamente de la agarosa, = mediante=20 tinci=F3n directa.

Dada su ventaja, en cuanto a = tiempo de=20 trabajo y a que las sondas son muy dif=EDciles de conseguir, = porque est=E1n=20 muy protegidas con patentes, optamos por utilizar al PCR como = t=E9cnica a=20 aplicar en el trabajo forense rutinario.=94 (23)=20

En=20 la t=E9cnica RFLP de Jeffreys, el llamado =93proceso de = digesti=F3n=94 del A.D.N.=20 que ya rese=F1amos -y que detallaremos a continuaci=F3n- consiste = en poner en=20 contacto la cadena de ADN con un enzima de restricci=F3n, la cual = act=FAa=20 cortando la doble cadena en puntos determinados. =

As=ED,=20 una cadena determinada ser=E1 cortada =20 tantas veces como secuencias espec=EDficas de = reconocimiento presente=20 para una enzima determinada. =93...=20 las enzimas llamadas =93endunocleosas de restricci=F3n=94 son = aplicadas a las=20 mol=E9culas de A.D.N. para cortar el =93ziper=94 de A.D.N. en = fragmentos. Estas enzimas reconocen = ciertas=20 secuencias en pares de nucle=F3tidos, o =93dientes=94 y cortan el = =93ziper=94 de ADN=20 en el punto que reconocen. = El=20 resultado son fragmentos del ADN diferentes en largo y n=FAmero = para cada=20 individuo.=94(24)

Una enzima de = restricci=F3n=20 particular cortar=E1 el A.D.N., solo si una secuencia espec=EDfica = de bases=20 est=E1 presente. Esta secuencia es conocida como el sitio de = restricci=F3n=20 para esa enzima.

=93Los = fragmentos de ADN=20 digeridos con una enzima de restricci=F3n espec=EDfica van a = generar=20 fragmentos de diferente tama=F1o, con solo que una de las bases en = el sitio=20 de restricci=F3n sea diferente. =20 Estos cortes de ADN que se observan despu=E9s del proceso = de=20 digesti=F3n producen los llamados =93fragmentos de restricci=F3n = de longitud=20 variable=94, en ingl=E9s, =93restriction fragment lenght = polymorphisms=94 o en su=20 abreviatura (RFLP`s) ya citados.

Muchos=20 de estos fragmentos van a tener secuencias de bases repetidas, = seg=FAn=20 vimos; y estas secuencias pueden rotularse con radioactividad para = ser=20 detectadas luego.

Las secuencias se = llaman =93Sondas=94 o = =93Probes=94. Una sonda es un = fragmento peque=F1o=20 de ADN de una =FAnica hebra marcadao con una mol=E9cula de = referencia (=20 marcado con radioactividad, por ejemplo) cuyas secuencias de base = ser=E1n=20 conocidas. Cuando una de estas sondas se hibrida con un fragmento = de ADN=20 que previamente ha sido desnaturalizado, la sonda va a adherirse a = la=20 secuencia de bases del A.D.N. que contenga una secuencia de = nucle=F3tidos=20 complementarios a la suya, para as=ED formar nuevamente la doble=20 h=E9lice. Entonces = la secuencia=20 de nucle=F3tidos en el filamento podr=E1 ser identificada, con la = referencia=20 radioactiva de la sonda con la cual se hibrid=F3=94. (25)=20

Existen=20 b=E1sicamente dos tipos de sondas: las monolocus y las multilocus, = as=ED =93Single-locus: Las unidades = de=20 repetici=F3n de ciertos minisat=E9lites son espec=EDficas de una = regi=F3n=20 particular (locus) y de un determinado cromosoma. Las sondas que se = combinan=20 exclusivamente con estas regiones son denominadas monolocus=20 (single-locus). Estas sondas van a detectar un =FAnico segmento = del A.D.N.=20 repetitivo en un sitio espec=EDfico de un filamento separado de su = complementario en los cromosomas.

En=20 cada estudio aparecen, dos copias por individuo, correspondientes = a los=20 dos alelos que pueden ser hipervariables entre s=ED. Suelen estar compuestas = por una=20 larga secuencia de nucle=F3tidos, con mayor variabilidad que los = que que=20 componen los multilocus (vease ilustraci=F3n N=BA 7, = P=E1g.606).=20

-Multi-locus:=20 Este tipo de sondas se acoplan a minisat=E9lites que est=E1n = presentes en=20 varios locus de diferentes cromosomas; suelen estar compuestas por = unos=20 10-15 pares de bases que se repiten m=FAltiples veces. En cada estudio aparecen = entre 10=20 y 20 bandas por persona (V=E9ase ilustraci=F3n N=BA 8, p=E1g = 607).=20

Entonces=20 la diferencia principal con las SINGLES- LOCUS=94 es que las = =93MULTI-LOCUS=94=20 detectan m=FAltiples segmentos del ADN repetitivo, localizados en = muchos=20 cromosomas, entonces detectan en forma simult=E1nea fragmentos de = ADN en=20 m=FAltiples regiones de de m=FAltiples cromosomas. (V=E9ase = ilustraciones N=BAs 9=20 y 10, P=E1gs. 608 y 609).

En=20 una comparaci=F3n de estos dos tipos de sondas, Gisbert Calabuig = nos se=F1ala=20 las siguientes similitudes y diferencias: =

1- =20 Informaci=F3n=20 aportada. Las = sondas=20 multilocus tienen una mayor capacidad discriminativa, al aparecer=20 m=FAltiples bandas. Las monolocus, por otra parte, son m=E1s = sensibles, ya que=20 al ser la sonda m=E1s larga se hibrida m=E1s = espec=EDficamente.=20

2- =20 Cantidad=20 y caracteres del D.N.A. necesario. Las multilocus necesitan=20 aproximadamente 1 ng de D.N.A. en perfecto estado, que no haya = sido=20 degradado. Las monolocus necesitan 100 ng de D.N.A., pudiendo = estar=20 degradado, siempre que no se haya afectado el fragmento que hay = que=20 hibridar por la sonda.

3- =20 Especificidad. Las sondas multilocus = permiten su=20 uso sobre D.N.A. = humano y de=20 ciertos animales superiores, mientras que las monolocus son = exclusivamente=20 para material humano.

4- =20 Utilidad.=20 Por sus caracter=EDsticas, las sondas multilocus son especialmente = aptas=20 para confirmar una paternidad y una imputaci=F3n penal no = suficientemente=20 filiada, mientras que las monolocus sirven para realizar estudios de = paternidad en=20 casos complejos en familias consangu=EDneas, as=ED como para = descartar una=20 acusaci=F3n o resolver casos en los que el D.N.A. no est=E9 bien=20 conservado...=94=20 (26) =20

El descubrimiento de = Jeffreys,=20 origin=F3 como es usual, al surgimiento de nuevos m=E9todos para = aislar el=20 A.D.N. y obtener los mismos resultados empleando diversas = t=E9cnicas,=20 siempre buscando todos, encontrar ese patr=F3n de bandas (que como = dijimos=20 es similar al de los productos comerciales) evidentemente, estos=20 diferentes procedimientos hacen variar los niveles de certeza y=20 confiabilidad en los resultados.

Secci=F3n=20 d) MULLIS- REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (O T=C9CNICA DEL=20 P.C.R.).

Si=20 el descubrimiento =93casual=94 del Dr. Jeffreys marc=F3 un hito en = la=20 investigaci=F3n forense, la t=E9cnica desarrollada por Mullis, = llamada en=20 ingl=E9s The Polymerase Chain Reaction, o P.C.R. como se conoce en = abreviatura, no fue menos trascendente para la ciencia. La idea b=E1sica del = P.C.R. es=20 producir grandes cantidades a partir de un fragmento espec=EDfico = de A.D.N.,=20 mediante la amplificaci=F3n selectiva de una simple mol=E9cula de = A.D.N.=20 much=EDsimas veces y en unas pocas horas, lo que contrasta con el = m=E9todo de=20 RFLP=B4s del Dr. Jeffreys. =93...El=20 principio de PCR est=E1 basado en la amplificaci=F3n enzim=E1tica = de un=20 fragmento de ADN que es flanqueado por dos =93primers=94 (son = peque=F1os=20 fragmentos de ADN, u oligonucle=F3tidos que han sido sintetizados = en el=20 laboratorio) que hibridizan o se unen al ADN ya desnaturalizado, = en cada=20 una de las hebras de la secuencia que nos interesa, por lo que = proveen un=20 sitio para que la enzima polimerasa inicie su labor.=20

Para=20 esto, las secuencias de bases de ADN que precede y proceden = inmediatamente=20 a la regi=F3n que pretendemos amplificar deben ser conocidas para = poder=20 sintetizar los =93primers=94. A=20 este respecto resulta de gran utilidad la labor que est=E1 = realizando el=20 Proyecto del Genoma Humano, cuyo objetivo b=E1sico es establecer = un mapa=20 gen=E9tico completo del ser humano.

Como=20 ven=EDamos diciendo, la polimerasa empezar=E1 a trabajar en el = final del=20 =93primer=94 y utilizando las bases disponibles (A, C, T, G) ir=E1 = atrayendo las=20 que se necesiten para sintetizar copias complementarias de cada = uno de los=20 filamentos. As=ED, = repetidos=20 ciclos de desnaturalizaci=F3n, alineaci=F3n de los =93primers=94 = con sus=20 secuencias complementarias y extensi=F3n con la polimerasa da como = resultado=20 la amplificaci=F3n de un segmento definido (V=E9ase ilustraciones = N=BA 12 y 13,=20 p=E1g. 611 y 612).=94(27) =20

=20 En lo referente al Proyecto del Genoma Humano, es prudente = acotar=20 que =93Simult=E1neamente, = el National=20 Center of Human Genome Research, oficina espec=EDficamente abocada = al=20 proyecto, ha anunciado la concreci=F3n de inversiones destinadas = al an=E1lisis=20 bio=E9tico de las consecuencias =E9ticas, legales y sociales que = el caudal de=20 informaci=F3n a obtenerse acarrear=E1, as=ED como a sugerir = l=EDneas pol=EDticas en=20 punto al manejo de tal informaci=F3n.

=20 El programa ha identificado tres grupos de cuestiones a = dilucidar:=20 los temas vinculados a la integraci=F3n de nuevas pruebas = gen=E9ticas en la=20 pr=E1ctica m=E9dica, que, m=E1s all=E1 de las responsabilidades = legales que=20 pudieran emerger de una realizaci=F3n deficiente de las mismas, no = parece=20 incidir demasiado en el campo jur=EDdico; los referidos a la = necesidad de=20 educaci=F3n y consejo a brindarse a los individuos sometidos a = pruebas=20 gen=E9ticas, as=ED como a la correcta evaluaci=F3n de los = resultados que impida=20 a los afectados traumas psicol=F3gicos, estigmatizaci=F3n y = discriminaci=F3n y,=20 finalmente, los temas vinculados al acceso y al uso de los = resultados de=20 las pruebas gen=E9ticas por terceros, incluyendo en tal = categor=EDa a las=20 compa=F1=EDas de seguro, a los investigadores biom=E9dicos y a los = empleadores.

=20 A su vez, en el =E1mbito europeo, el Consejo de Europa ha = adoptado un=20 =93programa espec=EDfico en salud diagn=F3stico gen=E9tico: = an=E1lisis del genoma=20 humano=94, cuya redacci=F3n definitiva fue aprobada en fecha 11 de = junio de=20 1990. En su = presentaci=F3n se=20 consigna que =93es una respuesta de Europa a los desaf=EDos = internacionales=20 que representan los proyectos de investigaci=F3n biol=F3gica de = gran=20 enevergadura en EE.UU. (cartograf=EDa y secuenciaci=F3n del = g=E9noma humano) y=20 Jap=F3n (Programa Cient=EDfico de Fronteras Humanas). Aunque es un programa de = investigaci=F3n=20 precompetitiva b=E1sica, puede dar lugar a nueva informaci=F3n y = nuevos=20 materiales potencialmente comercializables, pudiendo desarrollarse = tambi=E9n=20 nuevcos procesos tecnol=F3gicos=94. =20 Este programa responder=E1 la mejora de la resoluci=F3n del = mapa=20 gen=E9tico humano (esto es, la creaci=F3n de un mapa del genoma = humano en base=20 a marcadores del ADN para permitir a los investigadores localizar = f=E1cil y=20 r=E1pidamente los genes); la colecci=F3n de bibliotecas ordenadas = de clones (=20 es decir, colecciones de juegos ordenados de fragmentos de ADN que = representan en su totalidad al ADN presente en todo el genoma, en=20 cromososmas seleccionados o en fragmentos de cromosomas) y el=20 perfeccionamiento y difusi=F3n por los Estados miembros de las = tecnolog=EDas=20 de punta.

=20 Resulta fundamental captar en toda su magnitud las = consecuencias de=20 la tarea emprendida, cuya finalizaci=F3n se calcula dentro de = quince a=F1ois,=20 as=ED como el poder que otorgar=E1 la posesi=F3n de la = informaci=F3n=20 resultante.

=20 No se cuestiona la obtenci=F3n de los conocimientos, sino = el uso que=20 pueda llegar a d=E1rseles. = En=20 tal sentido, coincido con la postura de ANFISEN cuando, desde su = sitial de=20 cient=EDfico eminente, acotaba que no hay l=EDmites para el = conocimiento del=20 proceso de la vida, ni debe haberlos, pero s=ED para la = aplicaci=F3n de ese=20 conocimiento. Y agregaba que cuando se contemple la = implementaci=F3n de ciertas clases de = observaciones=20 cient=EDficas deber=EDa ser impuesto un cuidadoso control, llevado = a cabo por=20 adecuados paneles de expertos acad=E9micos, legales y = gubernamentales.=94=20 (28)

=20 La importancia en la determinaci=F3n del genoma humano es=20 inconmensurable, como bien se=F1ala la Agencia Reuters, en su = art=EDculo Mapa=20 Humano, =93El genoma es = una especie=20 de enciclopedia biol=F3gica que contiene todas las instrucciones = qu=EDmicas=20 para hacer un ser humano. Cada c=E9lula humana contiene un juego = completo,=20 que son los pares de cromosomas, los vol=FAmenes individuales que = contiene=20 la enciclopedia. Cada cromosoma est=E1 formado por millares de = genes, que=20 son los cap=EDtulos de cada volumen. =20 Se cree que hay hasta 100.000 genes en el genoma. Los genes determinan = todas las=20 caracter=EDsticas biol=F3gicas de la vida, desde enfermedades = hasta el color=20 del pelo y algunos aspectos de personalidad e=20 inteligencia.=94(29)

Kary=20 B. Mullis trabajaba para la Cetus Corporation en Emeryville, = California=20 (dicha empresa es ahora Perkin Elmer Corporation) cuando = descubri=F3 la=20 t=E9cnica P.C.R.esta empresa es la due=F1a de todas las patentes = relacionadas=20 a ella (enzimas, apararto, tamp=F3n o =93buffer=94, nucle=F3tidos, = etc), al punto=20 que si otra empresa quiere vender productos similares, debe pagar=20 =93royalties=94 o derechos de licencia a Perkin Elmer = Corporation. Si bien es hasta 1989 = que se=20 populariz=F3 el empleo de este m=E9todo, las primeras = publicaciones datan de=20 1985; como un dato anecd=F3tico cabe se=F1alar que la revista = norteamericana=20 =93Science=94 seleccion=F3 a esta t=E9cnica del P.C.R. como el = mayor suceso=20 cient=EDfico de 1989 y premi=F3 como =93la mol=E9cula del a=F1o, a = la A.D.N.=20 Polimerasa, que es la que genera la reacci=F3n. Adem=E1s, como hemos = dicho Mullis=20 recibi=F3 el Premio Nobel de qu=EDmica en 1993.

=20 Como = bien indic=F3=20 Kary Mullis: =93Sometimes = a good idea=20 comes to you when you are not looking for it. Through an = improbable=20 combination of coincidences, naivet=E9 and lucky mistakes, such a = revelation=20 came to me one friday = night=20 in April , 1983, as i gripped the steering wheel of my car and = sanked=20 along a moonlit mountain road into northern California=B4s redwood = country.=20 That was how i stumbled across a process that could make unlimited = numbers=20 of copies of genes, a process now known as the polymerase chain = reaction=20 (PCR).=94(30)=20 Traducido a la lengua de Cervantes, = ser=EDa=20 =93Algunas veces una idea le viene a uno cuando no se est=E1 = buscando. Por=20 medio de una poco probable combinaci=F3n de coincidencias, = ingenuidad y=20 errores afortunados, esa revelaci=F3n me vino en la noche de un = viernes en=20 abril de 1983, mientras tomaba el manubrio de mi carro y me = dirig=EDa hacia=20 la regi=F3n de =E1rboles =93redwood=94 del norte de = California. As=ED fue como tropec=E9 = con el=20 proceso que podr=EDa hacer un n=FAmero ilimitado de copias de = genes, un=20 proceso ahora conocido como la reacci=F3n en cadena de la = polimerasa=20 (PCR).

=20 De lo dicho por Mullis, se infiere que su hallazgo fue = realizado=20 con absoluta independencia de los trabajos de Jeffreys, por lo que = no es=20 dable sugerir que se bas=F3 en ellos, o que establecieron una = suerte de=20 competencia entre ellos por lograr el mismo cometido. Si el = descubrimiento=20 de Jeffreys fue mientras experimentaba para otro objetivo, el=20 planteamiento de Mullis fue un proceso mental, una idea genial = mientras=20 conduc=EDa su veh=EDculo.

=20 d.1-CONCEPTO DE = P.C.R.=20

=20 =93La=20 reacci=F3n en cadena con polimerasa (PCR, siglas en ingl=E9s de = Polymerase=20 Chain Reaction), puede definirse com un m=E9todo in vitro para la = s=EDntesis=20 enzim=E1tica de secuencias espec=EDficas de ADN, donde se utiliza = ADN=20 polimerasa, dos cadenas peque=F1as de nucle=F3tidos = (oligonucle=F3tidos)=20 llamados imprimidores y un fragmento de ADN que se utiliza como = molde,=20 todo en un amortiguador adecuado. =20 Los imprimidores se dise=F1an para unirse a fragmentos=20 complementarios de bandas opuestas del ADN molde, de manera que = definan la=20 regi=F3n de inter=E9s llamado =93ADN objetivo=94.(31)

=20 Se puede entonces, definir a la = t=E9cnica=20 P.C.R. como un amplificaci=F3n o copia del A.D.N. =93in vitro=94. = Dado que este=20 proceso ocurre en vivo, cada vez que las c=E9lulas se reproducen y = deben=20 previamente duplicar su A.D.N. (cuando se forma el cigoto, se = est=E1=20 duplicando el A.D.N.). De esta forma a trav=E9s del P.C.R. se = copia el=20 A.D.N. =93in vitro=94 por medios artificiales, con la ayuda de un = aparato ad=20 hoc.

=20 El prop=F3sito del P.C.R. es amplificar peque=F1as = cantidades de A.D.N.=20 y producir mayores cantidades, que permitan una mejor = caracterizaci=F3n a=20 posteriori.

=20 =93... Si se = conoce la=20 secuencia de una cadena simple de ADN, se podr=E1 deducir cu=E1l = es la=20 secuencia de la cadena complementaria y vamos a poder realizar una = serie=20 de t=E9cnicas anal=EDticas que permitan poner de manifiesto las=20 caracter=EDsticas de la regiones del ADN que, para identificar a = las=20 personas, nos interesan=94.(32) =20

=20 d.2- MATERIALES Y = PROCEDIMIENTOS NECESARIOS PARA LA T=C9CNICA DEL P.C.R.=20

=20 Lo primero que se necesita,- como = sugiere la=20 l=F3gica- son muestras de A.D.N. dichas muestras, depender=E1n de = la clase de=20 investigaci=F3n que estemos ejecutando (paternidad, = identificaci=F3n forense=20 de un cuerpo, de un presunto violador o de un homicida). Se = requieren=20 tantas muestras de A.D.N. como personas est=E9n relacionadas al = caso. Como indicamos con = antelaci=F3n,=20 para casos de paternidad, normalmente se usan tres muestras, = del posible padre, la madre = y el hijo.=20 Para ello, lo ideal es la toma de sangre fresca directamente de la = persona. En la muestra de sangre, interesan s=F3lo los leucocitos = o gl=F3bulos=20 blancos, ya que son los =FAnicos que tienen n=FAcleo y por ende, = A.D.N.=20 nuclear.

En=20 casos de investigaci=F3n criminal=EDstica de homicidios o = violaciones, las=20 muestras pueden obtenerse de manchas de sangre o semen de las = ropas o del=20 suelo y paredes de la escena del crimen, trozos de piel = encontrados debajo=20 de las u=F1as, flujo vaginal, un diente, determinados huesos, e = incluso=20 saliva (con las observaciones ya expresadas en secciones = anteriores). Como principio, lo usual = es que=20 las cantidades de A.D.N. sean muy reducidas en los elementos = pilosos,=20 semen o sangre encontrados. El A.D.N. se encuentra principalmente = en el=20 n=FAcleo de la c=E9lula(33), por lo que debe romperse la membrana=20 citoplasm=E1tica y la membrana nuclear a fin de extraerlo, ello se = logra=20 mediante un m=E9todo llamado =93lisis=94, que emplea unos = reactivos capaces de=20 romper las membranas pre-indicadas. Estos lisis, no alteran el = A.D.N. pues=20 s=F3lo rompen prote=EDnas pero no =E1cidos nucl=E9icos. As=ED se = obtiene A.D.N.=20 libre de prote=EDnas y de todos los fosfol=EDpidos que contienen = las=20 membranas. =93... El ADN que se desea = replicar=20 (copiar) puede venir en estado puro o ser s=F3lo una min=FAscula = porci=F3n de=20 alguna compleja mezcla de materiales biol=F3gicos. Basta con una gota de = sangre=20 disecada, un pelo, tejidos de alg=FAn cerebro momificado o = extractos de=20 semen hallados en el cuerpo de una v=EDctima violada. Todas son muestras = v=E1lidas para=20 practicar el PCR y dar respuesta a problemas de=20 identidad.=94(34)

=20 Aunque la prueba de P.C.R. se practica =FAnicamente con = A.D.N., es=20 posible hacer una =93retro transcripci=F3n=94 o cambio del A.R.N. = a A.D.N. El proceso demanda mayor = complejidad y excede los l=EDmites de nuestra = resenci=F3n.

=20 Volviendo al = P.C.R.=93Una vez extra=EDda la = sangre, se utiliza=20 una centr=EDfuga- m=E1quina que da vueltas a gran velocidad- para = separar el=20 plasma, los gl=F3bulos rojos y los blancos- s=F3lo se utilizan = estos =FAltimos-=20 los leucocitos- que se pasan por una pipeta a un tubo pl=E1stico, = donde se=20 le agrega una soluci=F3n llamada lisis, cuya funci=F3n es romper = la membrana=20 del n=FAcleo. As=ED = quedan=20 liberados los 23 pares de cromososmas que contiene cada c=E9lula y = por ende,=20 el ADN. Sin = embargo, este no=20 se encuentra a=FAn en estado puro, est=E1 mezclado con restos de = las membranas=20 y las prote=EDnas. Para aislarlo, se usa fenol y alcohol = cloroformo, dos=20 reactivos que solidifican las prote=EDnas. Luego de agitar el tubo, = el fenol=20 se va al fondo, las prote=EDnas quedan en el centro y la = soluci=F3n de lisis=20 arriba, junto con el material gen=E9tico. El siguiente paso es = separar esta=20 capa superior, pasarla a otro tubo y agregarle sal (acetato de = sodio) y=20 etanol absoluto, reactivos con los que la mol=E9cula de ADN se = precipitan en=20 una especie de =93motita=94 s=F3lida de color blanco. Esta se saca = y se deja=20 secar; finalmente, queda como un papelito fino, que otra vez se = pasa a=20 estado l=EDquido para aplicarle la t=E9cnica PCR.=94 (35)

=20 La rehidrataci=F3n del A.D.N. se = hace mediante=20 el uso de un =93buffer=94 y se mide la concentraci=F3n de la = =93madeja=94 de A.D.N.=20 a trav=E9s de una espectrofotometr=EDa o de una=20 espectro-fluorimetr=EDa..

=20 Adem=E1s de la obtenci=F3n de las muestras y la obtenci=F3n = del A.D.N. a=20 partir de ellas como se rese=F1=F3, se requieren los = Desoxi-nucle=F3tidos=20 trifosfatos o DNTP=B4s (Deoxynucleotide triphosphates en = ingl=E9s), que son=20 las bases qu=EDmicas que poseen una ribosa, un fosfato y una base=20 nitrogenada. S=F3lo que generados =93artificialmente=94 para poder = unir y=20 amplificar el A.D.N. nos referimos a los nucle=F3tidos que ya = detallamos=20 antes, adenina, citosina, guanina y tinina.

=20 Luego, necesitamos la enzima polimerasa o =93Taq = Polimerase=94, que es=20 una enzima termoestable. Es decir que soportar=E1 sin problemas = las altas=20 temperaturas que requiere la t=E9cnica P.C.R.. La taq polimerasa = proviene de=20 una bacteria que vive en nacientes de agua caliente, se aisla del = llamado=20 =93thermus aquaticus=94, con ciertas t=E9cnicas, las enzimas = deb=EDan reponerse en=20 cada ciclo, por no poder resistir las altas temperaturas, en = cambio la taq=20 polimerasa es eficiente, ya que soporta todo el proceso P.C.R. y = al final=20 logra quedar con la mitad de vida.

=20 Los imprimidores o =93primers=94 (en ingl=E9s), son los que = dan el sitio=20 de inicio, son una secuencia de bases o grupo de = oligonucle=F3tidos que se=20 han fabricado artificialmente, en una m=E1quina especial a la que = se le=20 indica la secuencia deseada, por ejemplo, una A, G, T, A,A,T,,G, = etc.=20 Puede ser hasta de 28 letras. Estas bases nitrogenadas = =96generadas=20 artificialmente- van a encontrar su regi=F3n complementaria en el = A.D.N.,=20 hasta que la secuencia est=E9 pegada. =20 Esto nos sirve para limitar la regi=F3n de inter=E9s, lo = cual significa=20 que se tiene que conocer los bordes de =E9sta, o sea., la = secuencia en que=20 se encuentran las cuatro letras (A,C,G,T) en los bordes de la = regi=F3n de=20 inter=E9s y que ser=E1n los l=EDmites o fronteras de la llamada = =93target=20 sequence=94 que es la regi=F3n que se quiere amplificar. =93...Estos bordes van a ser = conocidos,=20 gracias a la investigaci=F3n, dada a la tarea de secuenciar = regiones del=20 genoma humano, (sobre todo realizada en pa=EDses desarrollados = como EE.UU.)=20 y publicaciones en Revistas que indican la existencia de una = secuencia =93x=94=20 en el cromosoma uno, po citar un ejemplo, que va a limitar=20 =93tal=94regi=F3n. = Sin embargo,=20 existe un centro entre estas secuencias conocidas que no se = conoce,=20 recurrimos entonces para averiguarlos al uso de marcadores = gen=E9ticos, que=20 son partes de secuencia que ya se han descifrado. El llamado Proyecto de = genoma=20 Humano es un proyecto gigantesco a nivel mundial; qye trata de = secuenciar=20 todo el genoma humano. = En un=20 cromosoma hay millones de esas letras (A,C,G,T) y en la totalidad = del=20 genoma 3 mil millones de pares de bases. Se est=E1n tratando de = buscar=20 marcadores gen=E9ticos de regiones conservadas en las cuales todos = somos=20 similares y se publican mensualmente secuencias conocidas, las = cuales van=20 a ser fabricadas artificialmente para ser utilizadas como = Primers=94.=20 (36) =20

El=20 A.D.N. es una doble = h=E9lice=20 que se separar=E1 en dos, al romper la c=E9lula, se encuentran los = 23 pares de=20 cromosomas que todos tenemos (seres humanos) en cada una de las = c=E9lulas.=20 Obviamente al extraer el A.D.N. se extraen muchas c=E9lulas. = Cuando se=20 extrae el A.D.N. , =E9ste queda en un tubo con una soluci=F3n = acuosa y ah=ED se=20 le agregan los DNTP=B4s, la enzima Taq Polimerasa, el buffer y los = iniciadores. Los primers son los que van a limitar la secuencia = pos=E1ndose=20 espec=EDficamente en una regi=F3n de un cromosoma que es la que va = a=20 amplificar. El iniciador va a pegarse con una secuencia = complementaria,=20 pero s=F3lo donde encuentre la secuencia complementaria = =93total=94. Esto es lo espec=EDfico = del P.C.R. ,=20 pues donde existan esas 28 letras no van a existir otras 28 letras = iguales. En otra parte de ese A.D.N. y entonces los iniciadores = van a=20 saber donde pegarse.

El=20 agua es usada para diluir los reactivos, debe ser destilada tres = veces,=20 para que no contenga metal alguno y as=ED no sea =93dura=94 y todo = debe ser=20 est=E9ril. El aceite se pone sobre la reacci=F3n. El =93buffer=94 = es una soluci=F3n=20 utilizada en la reacci=F3n como un regulador del PH. O sea del = grado de=20 acidez o salinidad del medio, adecu=E1ndolo a las necesidades de = la enzima=20 Taq Polimerasa, para que esta realice una labor = eficiente.

Una=20 vez que a la muestra de A.D.N. se le han agregado los componentes = citados,=20 ponemos todo en una = centr=EDfuga, para que bajen los reactivos agregados y se colocan = en un=20 aparato el Termociclador, que produce varias temperaturas (94=BA, = 60=BA,y 72=BA)=20 en ciclos de aproximadamente un minuto, las veces que sea = indicado. =93...El PCR se inicia con un = =93ADN total=94,=20 que por sus condiciones qu=EDmicas normales siempre van a estar en = doble=20 banda. Este ADN se va a abrir en dos cadenas simples de ADN, = separando las=20 uniones A-T y C- G (como cadenas complementarias).=20

Al iniciar el PCR con un ADN = en doble=20 banda se programa el termociclador con temeperaturas de = aproximadamente=20 94=BA C por 1 minuto, lo que va a romper los enlaces de = hidr=F3geno y va a=20 abrir el ADN en dos = bandas=20 simples.=94(37) =

El=20 siguiente paso, se llama =93extensi=F3n=94 y es realizado por la = polimerasa y=20 las cuatro bases agregadas. La polimerasa inicia su actuaci=F3n en = el borde=20 de los iniciadores = y usando=20 las cuatro bases (A-T-G-C-) sintetiza copias complementarias de = cada uno=20 de los dos filamentos del A.D.N. =20 La temperatura de la =93extensi=F3n=94 es de 70=BA a 72 = =BA, esa es la=20 temperatura en la cual la polimerasa se pega al A.D.N. y va a = empezar a=20 extender la cadena, produciendo as=ED la replicaci=F3n. La enzima de polimerasa = se ubica=20 =FAnicamente donde est=E1 el imprimidor pegado formando regiones = en doble=20 banda. Como indicamos, la Taq Polimerasa en una enzima = termoestable, es=20 decir no muere durante el proceso, sin embargo su nivel =F3ptimo = lo alcanza=20 a los 72=BA. En cada ciclo del procedimiento se dobla la cantidad = del A.D.N.=20 presente al iniciarlo. Aunque se habla de la realizaci=F3n de un = promedio de=20 20 a 25 de = replicaci=F3n, a=20 efectos del P.C.R. = En Costa=20 Rica no resulta extra=F1o hacer hasta 35 o 40 ciclos.

Al=20 terminar los procedimientos anteriores, queda en el tubo una = soluci=F3n=20 acuosa, lo que corresponde es determinar si la t=E9cnica tuvo = =E9xito, es=20 decir, si la amplificaci=F3n del A.D.N. funcion=F3. Existen = b=E1sicamente tres=20 sistemas de verificaci=F3n, el m=E1s usado em la detecci=F3n del = producto del=20 P.C.R. es la Electroforesis, que consiste en colocar el A.D.N. con = ayuda=20 de una pipeta en una matriz de gelatina (gel de agarosa o = acrilamida) ,=20 que se torna en una especie de cedazo por el que necesariamente = tienen que=20 pasar las mol=E9culas, las m=E1s grandes tardan m=E1s en pasar, = mientras que el=20 A.D.N. pasa r=E1pidamente por ser m=E1s peque=F1o y queda = abajo.

El=20 gel se coloca sobre una fuente de poder con un voltaje = espec=EDfico a un=20 electrodo positivo (localizado por lo general debajo de la = bandeja) que es=20 que atrae las mol=E9culas del A.D.N. por que =E9stas tienen carga = negativa en=20 raz=F3n de los fosfatos. =20 Normalmente el A.D.N. no migrar=EDa pero va ser = =93llamado=94 por la=20 carga positiva. Se = debe=20 contar adem=E1s con un = Marcador=20 de Peso Molecular, que indica el peso que corresponde a cada banda = =F3 el=20 n=FAmero de bases de =E9sta. El=20 principio es que se van a separar las mol=E9culas por el peso = molecular (tama=F1o o peso de cada = una) y as=ED=20 se van a obtener las diferentes bandas, las cuales se pueden ver = con un=20 transluminador ultravioleta, colocado detr=E1s de la agarosa. Posteriormente se ti=F1e = el gel con=20 un reactivo espec=EDfico que se intercala entre las bases del = A.D.N. La tinci=F3n puede ser = con bromuro=20 de etidio o de plata, o bien utilizar la radioactividad a trav=E9s = de un=20 radiois=F3topo (marcaje radioactivo) o bien otro marcaje de tipo = no-=20 radioactivo, en raz=F3n del peligro de que los radiois=F3topos = generan=20 cancer.

Adem=E1s de la electroforesis se puede hacer la = verificaci=F3n=20 del P.C.R. mediante otro sistema llamado Secuenciaci=F3n que consiste en montar = una=20 reacci=F3n de secuenciaci=F3n utilizando =93kits=94 para tal = efecto y se realiza=20 una electroforesis que no es agarosa, sino en acrilamida con otros reactivos y otro sistema. En vez de un gel = peque=F1o (minigel)=20 se utiliza uno grande y vertical (maxigel), que lo que hace es = separar las=20 =93letras=94 para poder =93leer=94 y as=ED obtener una secuencia = de la banda, no su=20 tama=F1o. La = ventaja de=20 este sistema de secuenciaci=F3n es que es el mejor para detectar = mutaciones,=20 pues se identifica directamente el error que existe en la = secuencia de las bases de una = regi=F3n de=20 inter=E9s. El problema es que este sistema es m=E1s costoso. Puede = hacerse el=20 marcaje por m=E9todos radioactivos o no.

Otra=20 posibilidad de verificaci=F3n es el sistema de hibridaci=F3n. = Proceso que=20 puede realizarse mediante dos protocolos o formatos, el primero es = que el=20 producto de P.C.R. es colocado en membranas a las que se a=F1ade = una=20 soluci=F3n con una sonda (dot blot) y el otro en que las sondas = mismas son=20 inmovilizadas en una =FAnica membrana y usadas para capturar = producto P.C.R.=20 complementario (dot blot reverso).

d.3 = MEJORAS Y=20 NUEVAS APLICACIONES DE LA T=C9CNICA P.C.R. =

A=20 partir del modelo original de Mullis, se han derivado muchas = modalidades=20 de t=E9cnica P.C.R., en la actualidad hay m=E1s de veinte tipos = diferentes de=20 P.C.R. como son: el = anclado,=20 el inverso, el de regiones polim=F3rficas, al azar (random) = etc. Se utilizan diferentes = clases de=20 enzima, incluso existe una que produce retranscripci=F3n, es decir = =93fabrica=94=20 A.D.N. a partir de A.R.N. y otra que no s=F3lo va colocando = nucle=F3tidos sino=20 que se encarga de verificar si el =FAltimo nucle=F3tido es el=20 correcto.

Si=20 bien las pruebas de P.C.R as=ED como las de RFLP=B4s de Jeffreys, = se=20 utilizaron primariamente en pruebas de paternidad y casos penales, = se han=20 especializado y diversificado las pruebas del P.C.R. hacia otras=20 aplicaciones mayoritariamente coadyuvantes de las ciencias = m=E9dicas, a=20 continuaci=F3n intentamos una enumeraci=F3n de las mismas, = informaci=F3n=20 obtenida del trabajo de Hazzell Rodr=EDguez Cambronero y Vanessa Molina Incera, ya citado = con=20 antelaci=F3n:

En=20 Investigaci=F3n Gen=E9tica:

1- = Diagn=F3stico=20 prenatal de des=F3rdenes gen=E9ticos.

2- = Diagn=F3stico=20 de mutaciones

3- = Detecci=F3n de=20 portadores de genes espec=EDficos en familias y = poblaciones.

4- = Generaci=F3n de=20 sondas para mapeo gen=E9tico.

5- =20 Estudio de ligamentos de RFLP=B4s.

6- =20 Diagn=F3stico prenatal del sexo.

7- =20 Investigaci=F3n forense de restos e individuos. =20

En=20 Investigaci=F3n B=E1sica en Biolog=EDa Molecular:

1- =20 S=EDntesis de genes y modificaci=F3n gen=E9tica.

2- =20 Estudios de expresi=F3n g=E9nica.

3- =20 Secuenciaci=F3n de A.D.N.

En=20 Investigaci=F3n Cl=EDnica M=E9dica:

1- =20 Detecci=F3n y caracterizaci=F3n de pat=F3genos.

2- =20 Identificaci=F3n de oncogenes activados y caracterizaci=F3n = de=20 tumores.

3- =20 Monitoreo de progresi=F3n de enfermedades.

4- =20 Estudio de susceptibilidad y predisposici=F3n a=20 enfermedades.

A=20 manera de ejemplo de las aplicaciones m=E9dica, citamos dos casos. = En lo=20 relativo al S=EDndrome de Down, se asocia dicho mal a la regi=F3n = 21q que=20 abarca la mayor=EDa del comosoma 21. El S.I.D.A. puede ser = detectado=20 amplificando una regi=F3n de la prote=EDna del virus y efectuar la = comparaci=F3n=20 con la muestra de la persona.

d.4.=20 INTERPRETACION B=C1SICA DE LAS PRUEBAS P.C.R. =

Para=20 nuestros efectos, desde una perspectiva legal de interpretaci=F3n = del P.C.R.=20 =BFc=F3mo podemos utilizar el resultado de las pruebas?. Siendo = minimalistas=20 en la explicaci=F3n, hemos de indicar que tanto el RFLP como el = PCR, se=20 basan en comparaciones de muestras, a fin de determinar si los = perfiles=20 gen=E9ticos visibles en las placas hacen o no un =93match=94, es = decir si=20 coinciden o no entre s=ED.

Los=20 criterios que se manejan son de exclusi=F3n o inclusi=F3n. El 100% = s=F3lo existe=20 en exclusi=F3n, es decir es posible descartar que un sospechoso = sea el autor=20 de una violaci=F3n o el padre de un ni=F1o. El problema deviene en = la=20 inclusi=F3n, pese a que la prueba de P.C.R. se practica en los = sitios=20 polim=F3rficos del A.D.N., es decir de alta variabilidad de un = individuo a=20 otro (donde individuos no relacionados van a tener bandas = diferentes o=20 alelos distintos para cada marcador), siempre queda la posibilidad = de que=20 existen individuos gen=E9ticamente muy similares. Por lo que las pruebas = de P.C.R.=20 solamente pueden establecer niveles de probabilidad de autor=EDa o = paternidad. Por = eso, en un=20 caso penal, en donde existan otras pruebas e indicios en contra = del=20 acusado, obviamente, una prueba de P.C.R. que no lo excluya sino = m=E1s bien=20 lo incluya en un porcentaje elevado, ser=EDa suficiente para = llegar a un=20 convencimiento de la culpabilidad del imputado. No omitimos manifestar- = tal y como=20 lo hemos dicho antes- que en el caso de gemelos homocig=F3ticos, = es decir=20 formados a partir = de un mismo=20 =F3vulo, estas prueba no permite descartar a uno a favor del otro, = pues son=20 perfiles gen=E9ticamente id=E9nticos. =20 La =FAnica forma de identificar a los gemelos homocigotos, = es=20 mediante las huellas digitales, que siempre son =FAnicas en cada = ser=20 humano.

=93Como afirma la Dra. Sandra = Silva del=20 Centro de Investigaci=F3n en Biolog=EDa Celular y Molecular, se = corren=20 primeramente cinco marcadores y si todos coinciden se corren tres = m=E1s; ya=20 con ocho si las muestras siguen coincidiendo, pr=E1cticamente se = establecen=20 resultados contundentes.

Es = posible que en=20 dos o tres marcadores exista similitud por coincidencia, pero ya = corriendo=20 ocho marcadores es pr=E1cticamente imposible. =

E insistimos en que si en = alguno de=20 ellos las muestras no concuerdan , se descarta la paternidad o = sospecha en=20 un 100%; ya que en materia de exclusi=F3n con s=F3lo un marcador = que no d=E9=20 igual (incluso al repetirlo con la idea de evitar el error humano) = se=20 determina una exclusi=F3n libre de duda.=94(38)

=20 En una conversaci=F3n reciente con = la Dra=20 Silva (Mayo de 1999), ellas nos aclar=F3 que actualmente se corren = al menos=20 entre 10 y 19 marcadores, a efectos de una mayor precisi=F3n en la = identificaci=F3n. &nbs= p;

=20 Secci=F3n e) =20 AN=C1LISIS COMPARATIVO ENTRE LAS PRUEBAS DE R.F.L.P. DE = JEFFREYS Y EL=20 P.C.R. DE MULLIS.

=20 El R.F.L.P. es altamente discriminatorio- Los loci R.F.L.P. = son muy=20 polim=F3rficos, ello significa que la posibilidad de que una muestra = individual=20 coincida con otra es muy baja. =20 En los casos criminales, con correr 5 o 6 marcadores, se = puede=20 producir una probabilidad de coincidencia mayor de uno en un = mill=F3n. La=20 principal deficiencia del R.F.L.P. es que requiere A.D.N. de alta = calidad.=20 La degradaci=F3n del A.D.N. en una muestra forense puede llevar a = resultados=20 no concluyentes. La = exposici=F3n al medio ambiente, la descomposici=F3n bacteriana, = exposici=F3n=20 vaginal o o un inadecuado resguardo de la evidencia puede producir = la=20 degradaci=F3n del A.D.N. = que=20 limite la aplicaci=F3n del R.F.L.P. en muchos casos, a=FAn con = A.D.N.=20 degradado es posible utilizar los an=E1lisis del P.C.R. =

=20 Para las pruebas R.F.L.P. las muestras pueden ser demasiado = peque=F1as. El tama=F1o de la muestra m=EDnima para este = an=E1lisis es una mancha=20 de sangre de una moneda norteamericana de 25 centavos (quarter) y = una=20 mancha de semen del tama=F1o de una moneda de diez centavos = (dime). Cuando la muestra es muy = peque=F1a,=20 el P.C.R. es mucho m=E1s aconsejable.

=20 El an=E1lisis R.F.L.P. puede ser demasiado lento. Bajo las = mejores=20 circunstancias, el R.F.L.P. requiere de tres a cuatro semanas de = trabajo=20 de laboratorio. Por ejemplo, en raz=F3n del atraso en muestreos = pendientes,=20 el F.B.I. requiere de tras a cuatro meses. Como resultado, = imputados=20 inocentes pueden permanecer detenidos = innecesariamente.

=20 La prueba de P.C.R. es mucho m=E1s r=E1pida y de menos = costo que la de=20 R.F.L.P. El an=E1lisis de P.C.R. = requiere una=20 muestra menor e incluso m=E1s degradada de A.D.N. que el R.F.L.P. = en raz=F3n=20 de su extraordinaria sensibilidad. =20 Los resultados del P.C.R. pueden obtenerse de 48 a 72 = horas.=20

=20 Pese a las ostensibles facilidades = de las=20 pruebas de P.C.R. =93Las = ventajas de=20 la PCR tienen su precio. La facilidad con que se amplifica el ADN = exige=20 evitar el peligro de contaminaci=F3n inherente al poder = multiplicador de la=20 reacci=F3n. Los que d=EDa a d=EDa utilizan la PCR, aseguran que un = tubo en que=20 se ha realizado una reacci=F3n contiene =93enormes cantidades=94 = de ADN, al=20 abrir el tubo que sale caliente del termociclador el vapor de agua = alcanza=20 el ambiente del laboratorio...=94 (39) =20

Secci=F3n f) EL CASO O.J. = SIMPSON.=20

Este=20 controversial caso de la justicia norteamericana, resulta muy = ilustrativo=20 acerca de los resultados de pruebas de A.D.N. y su valoraci=F3n en = un=20 sistema de jueces de conciencia (jurado). Por ello quisimos = rese=F1arlo a=20 fin de ratificar la importancia de esta nueva tecnolog=EDa al = servicio de la=20 criminal=EDstica.

=20 La tarde del 12 de junio de 1994, O.J. Simpson y su ex = esposa=20 Nicole Brown asistieron a una presentaci=F3n escolar de su = hija. Posteriormente Nicole = acompa=F1ada=20 de sus dos hijos cen=F3 en un restaurante cercano a su domicilio, = olvid=F3=20 unos anteojos. Ronald Goldman, mesero y amigo de Nicole decidi=F3 = llev=E1selos=20 a su casa. Cerca de = las 10 de=20 la noche, un automovil con las luces encendidas es observado = frente a la=20 casa de Nicole. Esa noche, ella y Ronald Goldman mueren = apu=F1alados.=20 Posteriormente, (el 16 de junio, un testigo afirma que el carro = observado=20 frente a la casa, coincide con el de Simpson).

=20 A las 10:45 p.m. de esa misma noche, un chofer de servicio = de=20 limosinas recoge a O.J. Simpson en su casa y lo lleva al = aeropuerto, lo=20 observa agitado y sudoroso. A las 11:45 pm. Simpson vuela a = Chicago, es=20 observado durante el vuelo en actitud serena. El 13 de junio, = d=EDa lunes,=20 al ser las 12:10 a.m. los cuerpos de Nicole y Goldman son hallados = al=20 final de unas gradas frente a la casa de Nicole. Simpson se = registra en un=20 hotel de Chicago, y la polic=EDa de ese lugar encuentra = posteriormente=20 sangre en una toalla , s=E1banas y adem=E1s un vaso = quebrado.

O.J.=20 Simpson regresa a Los Angeles donde es interrogado, su abogado = defensor=20 lanza la coartada, alegando que Simpson estuvo en su casa a la = hora de los=20 homicidios. En la = casa de=20 Simpson la polic=EDa recoge evidencias: unos zapatos deportivos y = un guante=20 ensangrentado. El = d=EDa 14 se=20 da a conocer el historial de violencia dom=E9stica del ex jugador = en contra=20 de su ex mujer. Horward Weitzam renuncia a la defensa de Simpson y = el caso=20 es asumido por Robert Shapiro. =20 Simpson acude al funeral de Nicole. El 17 de junio, la = polic=EDa=20 avisa a Shapiro su intenci=F3n de arrestar al sospechoso, Simpson = estaba en=20 casa de un amigo, Al Cowlings. =20 Cuando llegan Shapiro y cuatro doctores a dicha casa, ya = Simpson y=20 Cowlings se hab=EDan marchado. Shapiro ofrece una conferencia de = prensa en=20 donde lee una carta en que Simpson se declara inocente, el abogado = teme=20 que se vaya a suicidar.

Al=20 hacer una llamada al 911, Simpson alega que quiere suicidarse y = pide=20 hablar con su madre, as=ED se inicia la televisada persecuci=F3n = de Simpson en=20 su Ford Bronco color blanco. =20 Finalmente es persuadido de que se entregue al llegar a su = casa y=20 es conducido a la estaci=F3n policial.

=20 Nicole Brown fue hallada en posici=F3n fetal con heridas de = cuchillo=20 y la garganta cortada, el cuerpo de Goldman revela que fue = apu=F1alado en=20 repetidas ocasiones y se encuentran signos de un violento = forcejeo. Cerca de los cuerpos se = encuentran=20 los anteojos de la madre de Nicole, un guante de cuero = ensangrentado y una=20 boina con cabello que a simple vista se asemeja al de O.J. = Simpson. Tambi=E9n se encontr=F3 = cabello en el=20 cuerpo de Goldman. = La=20 fiscal=EDa sostiene que O.J. mat=F3 a Goldman al verse sorprendido = cuando=20 asesinaba a Nicole.

Se=20 tomaron muestras de los cuerpos de las v=EDctimas y en algunas = =E1reas de la=20 escena del crimen, la fiscal=EDa practic=F3 pruebas de A.D.N. a = las muestras y=20 demostr=F3 que algunas de las muestras de sangre, incluso las = dejadas por=20 marcas de pisadas alej=E1ndose de los cuerpos coinciden con el = perfil=20 gen=E9tico de Simpson.

=20 El guante ensangrentado encontrado en la casa de Simpson = coincidi=F3=20 con su A.D.N. La = defensa=20 asever=F3 que =E9ste fue =93plantado=94 en la escena del crimen = por el detective=20 de Los Angeles Mark Fuhrman, por razones racistas. La sangre del veh=EDculo = Bronco fue=20 objetada en raz=F3n de que no fue obtenida inmediatamente y pudo = ser=20 manipulada. Mientras que la fiscal=EDa sostuvo que en el carro de = Simpson se=20 encontraron diez mil d=F3lares en efectivo y una barba y bigote = postizo, lo=20 que evidencia la actitud de un culpable, la defensa = argument=F3 que ese dinero era para = los hijos=20 de Simpson y que =E9l iba a visitar la tumba de Nicole antes de = suicidarse,=20 alegaron que los postizos los intent=F3 usar en un viaje a=20 Disneylandia.

=20 Todo el alegato de la defensa en cuanto a la aplastante=20 coincidencia de las muestras con el A.D.N. del ex futbolistas, se = bas=F3 en=20 negarle valor a las mismas, alegando que no son precisas y que = adem=E1s la=20 evidencia fue pobremente recolectada, cuando no alterada por los=20 investigadores del caso.

=20 Este era un caso promisorio para la prueba cient=EDfica del = A.D.N. el=20 sistema de jurado, dificultaba la comprensi=F3n de dicha probanza. = Las=20 bater=EDas de la defensa se concentraron en cuanto a este t=F3pico = a sostener=20 dos grandes premisas:

=20 -Que la comunidad cient=EDfica no ha establecido un = consenso en el=20 c=E1lculo de coincidencias entre dos muestras, es decir que no = existe un=20 parametro de inclusi=F3n universalmente aceptado.

=20 -Que no hay seguridad que no hayan ocurrido errores = incriminatorios=20 en los laboratorios de pruebas de marcadores = gen=E9ticos.

=20 Pese a que las primeras pruebas con P.C.R. en este caso, = fueron de=20 s=F3lo tres marcadores, lo que daba una posibilidad de que al = menos 100=20 personas de Los Angeles tuvieran ese perfil gen=E9tico, se = repitieron con=20 cuatro marcadores m=E1s, asi las probabilidades de encontrar a = alguien=20 similar a O.J. Simpson eran de uno en 100 millones, es decir a lo = sumo 3=20 personas en todos los EE.UU. pese a ello O.J. Simpson fue = absuelto. Pese a que en California = , como en=20 todas las cortes estadounidenses, la prueba del P.C.R. es admitida = y=20 generalmente un resultado incriminatorio de la misma termina en = condena=20 para el implicado. O.J. Simpson fue absuelto en raz=F3n de que no = hubo=20 concenso del jurado, pues se requiere unanimidad en el veredicto=20 condenatorio. Se ha = dicho en=20 los medios de prensa, que los honorarios de peritos y abogados = defensores,=20 hizo que el O.J. Simpson =20 perdiera la mayor parte de su hasta entonces vasta=20 fortuna.

=20 Una de las aristas dif=EDciles de comprender para nuestra = formaci=F3n=20 romano-germ=E1nica fue la reciente condena en sede civil de O.J. = Simpson=20 acerca de los mismos hechos, lo que denota la culpabilidad que = hab=EDa=20 evidenciado la prueba del P.C.R. sin embargo, O.J. Simpson est=E1 = en=20 libertad y no existe posibilidad legal de confinarlo en prisi=F3n, = ya que la=20 fiscal=EDa perdi=F3 la =FAnica oportunidad que tuvo a esos = efectos. Parece ser que el = sistema=20 selectivo del derecho penal denota una vez m=E1s su injusto = planteamiento, y=20 as=ED =96 bancarrota- O.J. Simpson aunque homicida, juega golf por = las tardes=20 soleadas de California.

TITULO = II.-=20 ESTAD=CDSTICAS COSTARRICENSES EN PRUEBAS DE P.C.R. =20

CAPITULO 1.-=20 AN=C1LISIS ESTADISTICOS DE LAS PRUEBAS DE P.C.R EN CASOS DE = PATERNIDAD Y=20 CASOS PENALES DURANTE 1998 Y 1999. =20

=20 Secci=F3n a) PRUEBAS DE P.C.R. EN LA UNIDAD DE A.D.N. SECCI=D3N DE = BIOQU=CDMICA DEL=20 DEPARTAMENTO DE LABORATORIO DE CIENCIAS FORENSES DEL ORGANISMO DE=20 INVESTIGACI=D3N JUDICIAL DURANTE EL A=D1O DE 1999. =20

=20 Hace apenas unos ocho meses, la = Dra. Marta=20 Espinoza, concluy=F3 su maestr=EDa en Biolog=EDa Molecular con = =E9nfasis en A.D.N.=20 en la Universidad de Costa Rica. =20 Se reintegr=F3 al Poder Judicial asumiendo la jefatura de = la Unidad=20 de A.D.N. Apenas en = Enero de=20 este a=F1o, se comenz=F3 a llevar un registro completo de las = pruebas de=20 P.C.R. en raz=F3n de que con antelaci=F3n, se hac=EDan pruebas de = ant=EDgenos=20 tradicionales en combinaci=F3n con el P.C.R. en algunos = casos. Con la llegada de la = Doctora=20 Espinoza, se logr=F3 una mayor uniformidad en las pruebas de = P.C.R. y un=20 eficiente manejo estad=EDstico. =20 Esa es la raz=F3n por la que no se pudo obtener una = estad=EDstica=20 confiable de pruebas de P.C.R. efectuadas durante 1998. As=ED = informaremos=20 de las pruebas citadas, efectuadas y salidas (resueltas) de P.C.R. = de=20 enero a abril de 1999.

=20 La Doctora Espinoza nos manifest=F3 que en pruebas de = P.C.R. para=20 paternidad se dan = unas 75=20 citas mensuales, y a mayo de 1999, hay unos casos de filiaci=F3n = que esperan=20 el otorgamiento de una cita. =20 Recientemente la Unidad de A.D.N. le solicit=F3 al Consejo = Superior=20 del Poder Judicial, quince millones de colones para compra de = reactivos y=20 una plaza para secretaria, que estar=EDa dedicada exclusivamente a = esta=20 unidad, con el prop=F3sito de podar brindar hasta 128 citas=20 mensuales.

A=20 continuaci=F3n expondremos gr=E1ficamente el n=FAmero de pruebas = P.C.R. de=20 Paternidad de enero a abril de 1999. Indicaremos las citas = conferidas, el=20 ingreso completo de muestras y los casos resueltos.=20

=20 En enero de 1999, no hubo citas, 82 en febrero, 83 marzo y = 59 en=20 abril. De las citas = conferidas solo se presentaron y se obtuvieron muestras completas, = 12 en=20 enero, 12 en febrero, 25 en marzo y 21 en abril de 1999. De las muestras = completas,=20 salieron resueltas, 9 casos en enero, 30 en febrero, 51 en marzo y = 51 en=20 abril de 1999.

&nbs= p; =20 De las pruebas de P.C.R. en casos penales,no se recibi=F3 = ninguna=20 muestra en Enero de 1999, =20 pero se resolvieron 10 casos, 8 de violaci=F3n/ violaci=F3n = y=20 homicidio; 2 de personas desaparecidas.

=20 En febrero de 1999, ingresaron 2 casos de violaci=F3n y 2 = de=20 sustracci=F3n de menor. Se resolvi=F3 1 caso de intento de = homicidio/=20 homicidio.

=20 En Marzo de 1999, se recibieron 5 casos de violaci=F3n/ = violaci=F3n y=20 homicidio. Se resolvieron 2 de estupro; 6 de violaci=F3n y = violaci=F3n y=20 homicidio y 2 de = homicidio/=20 intento de homicidio.

=20 En abril de 1999, ingresaron 1 caso de incesto y 1 de=20 homicidio/intento de homicidio. Fueron resueltos 3 casos de = violaci=F3n/=20 violaci=F3n y homicidio ; y 2 de sustracci=F3n de = menor.

=20 Gr=E1ficamente, los casos ingresados por delitos y meses = son:=20

=20 Los=20 casos resueltos, seg=FAn el mes y tipo de il=EDcitos = son:

=20 En el caso de sustracci=F3n de menor se resolvieron 2 casos = en abril=20 de 1999:

=20 Secci=F3n b.- = PRUEBAS DE=20 P.C.R. SOLICITADAS POR EL PODER JUDICIAL AL CENTRO DE = INVESTIGACION EN=20 BIOLOG=CDA MOLECULAR Y CELULAR DE LA UNIVERSIDAD DE COSTA RICA = DURANTE=20 1998.

=20

=20 Independientemente de sus = actividades=20 habituales de investigaci=F3n, el Centro citado, a solicitud de = autoridades=20 judiciales, la Universidad de Costa Rica coadyuv=F3 con la = realizaci=F3n de=20 pruebas de P.C.R. en casos penales y de paternidad. Si bien el Organismo de=20 Investigaci=F3n Judicial, -a trav=E9s de su unidad respectiva- es = el encargado=20 usual de practicar estas pruebas. =20 Las partes del proceso penal o de familia pueden solicitar = un nuevo=20 peritaje, en cuyo caso interviene este Centro de la = U.C.R.

=20 Durante 1998, se le hicieron 33 solicitudes de pruebas de = P.C.R. de=20 paternidad al Centro, de ellas, s=F3lo 19 fueron practicadas con = tr=EDo=20 completo, es decir con toma de muestra de sangre del presunto = padre, madre=20 e hijo. La raz=F3n de este d=E9ficit obedece a la inasistencia = principalmente=20 del supuesto padre. = En el 90%=20 de las pruebas practicadas de P.C.R. no se excluy=F3 al presunto = padre, ello=20 en raz=F3n de que- seg=FAn explic=F3 la Dra. Silva- generalmente = las madres=20 saben quien es el padre de su hijo, aunque no = necesariamente.

=20 Gr=E1ficamente=20 esto se puede expresar as=ED.=20

=20 En materia penal, el Centro coadyuv=F3 en 3 casos = =FAnicamente durante=20 1998. Por ser de inter=E9s los resumiremos: Cuando apareci=F3 el = cuerpo de=20 Ciro Monge, en el mismo sitio aparecieron otros restos =F3seos. Un = joven=20 presuntamente narcotraficante fue detenido en Gu=E1piles para esas = fechas,=20 en una celda del O.I.J de esa localidad se encontr=F3 una mancha = de sangre=20 que correspond=EDa a esa persona, se obtuvo dicha conclusi=F3n a = ra=EDz de que=20 se hizo el P.C.R. a los padres del muchacho y se compar=F3 con la = muestra=20 sangu=EDnea. Ello = demostr=F3 que=20 esa persona al menos estuvo detenido en el sitio. Al comparar la = sangre=20 con los restos =F3seos, se determin=F3 que correspond=EDan a la = misma=20 persona.

=20 El segundo caso, se refiere al cuerpo de una mujer hallada = sin vida=20 en las cercan=EDas de la Universidad para la Paz en Ciudad = Col=F3n; la polic=EDa=20 judicial sospechaba del esposo, y mediante el uso de una sustancia = llamada=20 luminol que detecta las peroxidasas presentes en la sangre, es = posible=20 encontrar =E9sta aunque se lave el lugar donde se encuentra. El problema radica en = que las=20 peroxidasas tambi=E9n se encuentran en los jugos de las = frutas. En la alfombra de un = microbus=20 Volswagen, propiedad del marido de la v=EDctima, se encontr=F3 = =96usando=20 luminol- peroxidasas. = Las=20 pruebas de P.C.R. no detectaron A.D.N. por lo que se enviaron las = muestras=20 a Santiago de Compostela en Espa=F1a, a fin de hacer pruebas en un = prestigioso laboratorio, = pero=20 con A.D.N. mitocondrial y los resultados fueron negativos. Por lo = que las=20 peroxidasas encontradas en el veh=EDculo o no eran de sangre o = estaba=20 excesivamente degradada como para permitir una prueba=20 incriminante.

=20 El =FAltimo caso tiene relaci=F3n con el taxista pirata que = presuntamente mataba hombres j=F3venes nicaraguenses y tiraba los cuerpos en el = Parque=20 Braulio Carrillo. = La=20 investigaci=F3n del A.D.N. en las muestras de sangre enviada, no = continu=F3 ya=20 que el Ministerio P=FAblico decidi=F3 prescindir de esta prueba = indiciaria,=20 aparentemente por la existencia de elementos probatorios de mayor = contundencia.

CONCLUSIONES: =20

a).- = Es evidente=20 que dentro del programa de las Universidades p=FAblicas o = privadas, a nivel=20 de Licenciatura en derecho no existe una c=E1tedra integral de=20 criminolog=EDa. = Mucho menos es=20 dable esperar que se estudien las implicaciones del A.D.N. en la=20 investigaci=F3n criminal=EDstica. =20 Esta situaci=F3n debe ser modificada. =20

b).- = El tema del=20 A.D.N. en general, suscita enorme pol=E9mica en la sociedad, las=20 implicaciones =E9ticas de este campo cient=EDfico son enormes. = Particularmente=20 lo relativo al =93dise=F1o a nivel industrial=94 de hombres y = mujeres con=20 caracter=EDsticas espec=EDficas.

c).- = El Proyecto=20 Internacional del Genoma Humano permitir=E1 un mapeo gen=E9tico = del ser=20 humano, es decir del conjunto de los cromosomas y genes = distribu=EDdos en=20 zonas localizables del A.D.N. Cuando esta empresa sea conclu=EDda, la = ingenier=EDa=20 gen=E9tica experimentar=E1 un =93boom=94 sin precedentes. Esto = permitir=E1 la=20 prevenci=F3n de enfermedades y malformaciones, como el S=EDndrome = de Down y la=20 Enfermedad Mani=E1co-Depresiva (Bipolar), por citar dos = ejemplos. =20

d).- = En un=20 futuro no muy lejano, la clonaci=F3n humana ser=E1 casi rutinaria. = Se ignoran=20 como esto repercutir=E1 en el orden jur=EDdico y societario. Pero=20 evidentemente modificar=E1 dichas estructuras. =

e).- = La=20 informaci=F3n gen=E9tica contenida en el A.D.N. resulta = determinante en la=20 vida futura del individuo en cuanto a su genotipo y fenotipo. = =20

f).- = Los=20 gemelos id=E9nticos u homocig=F3ticos son gen=E9ticamente = id=E9nticos, la =FAnica=20 forma de diferenciarlos es a trav=E9s de sus huellas digitales, ya = que no=20 existen dos exactamente iguales.

g).- = La=20 diferencias entre especies se deben al n=FAmero de cromosomas y la = constituci=F3n de los genes; las apariencias pueden ser = enga=F1osas. Por ejemplo, aunque las = rayas y=20 los tiburones, parecen fenot=EDpicamente muy diferentes, en la = clasificaci=F3n=20 zool=F3gica, pertenecen a la misma familia (su estructura = genot=EDpica no es=20 tan diversa).

h).- Las dos pruebas = principales a=20 partir del A.D.N. para resolver casos penales y de paternidad, = as=ED como la=20 identificaci=F3n de restos =F3seos, son: el R.F.L.P. ( Fragmentos = de=20 Restricci=F3n de Longitud Polim=F3rfica) del Doctor Alec Jeffreys = y el P.C.R.=20 (Reacci=F3n en Cadena de la Polimerasa) del Doctor = Mullis. =20

i).- = El=20 P.C.R. es m=E1s r=E1pido, econ=F3mico y sensible que el R.F.L.P. = adem=E1s permite=20 trabajar a partir de muestras de menor tama=F1o y densidad. Las = muestras=20 usuales, son sangre, piel, u=F1as, elementos pilosos, restos = =F3seos e incluso=20 saliva. =C9stas deben ser recogidas con extremo cuidado y = almacenadas con=20 apego absoluto a la cadena de custodia. =

j).- = Es=20 posible presentar y sustentar un procedimiento de revisi=F3n, con = base a las=20 pruebas de A.D.N. que excluyan al sentenciado de la autor=EDa de=20 cr=EDmenes. Ello, = conforme al=20 art=EDculo 408, inciso e) del C=F3digo Procesal Penal vigente, que = literalmente reza: =93e) Cuando=20 despu=E9s de la condena se descubran nuevos hechos o nuevos = elementos de=20 prueba que solos o unidos a los ya examinados en el proceso , = evidencien=20 que el hecho no existi=F3, que el condenado no lo cometi=F3 o que = el hecho=20 cometido encuadra en una norma m=E1s favorable.=94(El subrayado es = nuestro).

k).- = El ser=20 humano tiene 23 pares de cromosomas (46 en total), heredados en = partes=20 iguales del padre y la madre conforme a las leyes gen=E9ticas de=20 Mendel.

l).- = Las=20 pruebas de P.C.R. y R.F.L.P. sirven para excluir paternidades y = autor=EDa de=20 delitos a un 100%, pero son prueba indiciaria en esos mismos casos = cuando=20 se trata de una inclusi=F3n. En=20 materia de paternidad, a partir de un 99.73% es imposible = descartar al=20 individuo como padre.

m).- El = habeas data=20 aplica a las pruebas con A.D.N. por lo que la informaci=F3n = obtenida del=20 individuo, en los casos permitidos por ley, debe ser celosamente=20 resguardada.

n).- = Al igual=20 que en los pa=EDses m=E1s desarrollados, se hace imperativo en = Costa Rica, la=20 creaci=F3n de un Registro de Perfiles de A.D.N. de quienes han = sido=20 sentenciados por delitos sexuales y homicidios, a fin de facilitar = el=20 descarte o inclusi=F3n de estas personas en hechos delictivos = futuros de esa=20 naturaleza. Es necesaria una reforma legal que establezca esta=20 innovaci=F3n.

o)=20 La hip=F3tesis del trabajo se confirma, ya que hasta el d=EDa de = hoy, la=20 ciencia no ha demostrado que sea gen=E9ticamente posible la = transmisi=F3n=20 hereditaria de factores que induzcan a conductas socialmente = desviadas,=20 tal como la delincuencia. Por lo que persiste la discusi=F3n = te=F3rica entre=20 natura y nurtura como etiolog=EDa del delito. Nos inclinamos por = =E9sta=20 =FAltima, sin embargo, -tal y como sugerimos en la hip=F3tesis = subsidiaria-=20 creemos que ciertas configuraciones genot=EDpicas del individuo, = al ser=20 expuestas a factores ex=F3genos (nurtura) pueden dar resultados = dis=EDmiles.=20 Por ejemplo: Un ni=F1o hu=E9rfano que haya heredado un coeficiente = intelectual=20 muy elevado, posiblemente no adecuar=EDa su conducta al = Ordenamiento=20 Jur=EDdico de la misma manera, en el evento de ser educado por = sacerdotes, o=20 por un estafador.

BIBLIOGRAF=CDA CONSULTADA =20

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Entrevistas=20 con la Doctora Sandra Silva, del Centro de Investigaci=F3n en = Biolog=EDa=20 Molecular y Celular de la Universidad de Costa Rica. Durante abril y mayo de = 1999, en=20 la Ciudadela de la Investigaci=F3n, Sabanilla de Montes de Oca, = San Jos=E9-=20 Costa Rica.

Entrevista=20 con la Doctora Marta Espinoza, de la Unidad de A.D.N. de la = Secci=F3n de=20 Bioqu=EDmica del Departamento de Laboratorio de Ciencias Forenses = del=20 Organismo de Investigaci=F3n Judicial. El d=EDa 22 de abril de = 1999 en San=20 Joaqu=EDn de Flores. Costa Rica.

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NOTAS:

(1)=20 An=F3nimo: Mendel y la Gen=E9tica: Los Ch=EDcharos del = Monge. En Semanario Universidad. = Suplemento Crisol, 6 de abril de 1990, p.2.

(2)=20 Avers, Charlotte. Biolog=EDa Celular. Grupo Editorial = Iberoam=E9rica. M=E9xico, 1983, 2=AA edici=F3n, p.285.

(3) Nelson, = Gideon.=20 Conceptos Fundamentales de Biolog=EDa. Editorial Limusa, = M=E9xico, 1980,=20 p.23.

(4) Frankel, = Edward.=20 D.N.A.El Proceso de la Vida. =20 Siglo XXI Ediciones, M=E9xico, 1984. 13=AAedici=F3n, = pp.16-17.

(5) Frankel, Edward. Op. Cit. p.=20 42.

(6) Watson, James. = Biolog=EDa=20 Molecular del Gen. Fondo=20 Educativo Interamericano. M=E9xico, 1983, pp. 53-54.

(7) Vicente = C=F3rdoba, Carlos.=20 Biolog=EDa Celular y Molecular. H. Blume Ediciones, Madrid, = Espa=F1a, 1979, P.=20 175.

(8) Frankel, Edward. Op. Cit. p.=20 7.

(9) Rodr=EDguez Gamboa, = Tatiana.=20 Reacci=F3n en Cadena con Polimerasa (PCR). Escuela de Qu=EDmica, = Universidad=20 de Costa Rica. 1994, p.9.

(10) Borras=E9 = Povedano,=20 Guiselle y otros. La Prueba de los Marcadores Gen=E9ticos y su = Aplicaci=F3n en=20 Materia Criminal. Tesis para=20 optar por el grado de Licenciatura en Derecho, Facultad de = Derecho,=20 Universidad de Costa Rica, San Jos=E9, Costa Rica, 1992, = p.107.

(11) = Junqueira, L.C.=20 Biolog=EDa Celular. Ediciones=20 Cient=EDficas, La Prensa Mexicana S.A. M=E9xico, 1984, = p.56.

(12) Sin = embargo, seg=FAn=20 entrevista que sostuvimos con la Doctora Marta Espinoza, encargada = del=20 Laboratorio de A.D.N. del O.I.J. , el d=EDa 22 de abril de 1999, = en el=20 Circuito Judicial de San Joaqu=EDn de Flores, en el caso de = gemelos=20 id=E9nticos o monocig=F3ticos, los marcadores de A.D.N. revelan = que la=20 secuencia es igual en ambos, lo que contrar=EDa la premisa = enunciada en el=20 texto.

(13) Borras=E9 = Povedano,=20 Guiselle y otros. Op.=20 Cit. = p.=20 113.

(14) Frankel, Edward. Op. Cit. pp. = 58-59

(15) Maris Mart=EDnez, = Stella.=20 Manipulaci=F3n Gen=E9tica y Derecho Penal. Editorial Universidad, = Buenos=20 Aires, 1994, p.33.

(16) Maris = Mart=EDnez, Stella.=20 Op.Cit. p.33.

(17) Maris = Mart=EDnez,Stella.=20 Op.Cit. p.p.33 y 34.

(18) Borras=E9 = Povedano,=20 Guiselle y otros. Op=20 Cit. pp. = 116-117.

(19) Molina Maricell y = Lutz=20 Giselle. Laboratorio de Criminal=EDstica, Tomo II, Pruebas de = Marcadores=20 Gen=E9ticos. Universidad Estatal a Distancia, 1995, pp. 59 y = 60.

(20) = Entrevista, Op.Cit.22=20 de abril de 1999.

(21) Mar=EDn = Rojas, Rafael. La=20 Huella Gen=E9tica (La Tecnolog=EDa del ADN). Revista de Medicina = Legal,=20 Diciembre de 1993 -Mayo de 1994, p.55.

(22) P=E9rez, = Carmen. Las=20 Mejores Pistas. Internet,=20 INTERNET/dna 1.html.

(23) Mar=EDn = Rojas, Rafael.=20 Op Cit.=20 p.56.

(24) Borras=E9 Povedano = y Otros.=20 Op Cit. p.=20 118.

(25) Rodr=EDguez = Cambronero,=20 Hazell y Otra. = El Impacto de la = T=E9cnica P.C.R. en=20 la Investigaci=F3n y Esclarecimiento del delito de Homicidio y el = Delito=20 Sexual de Violaci=F3n. Tesis de=20 Graduaci=F3n para optar por el t=EDtulo de Licenciatura en Derecho. Facultad de = Derecho,=20 Universidad de Costa Rica, san Jos=E9, Costa Rica, 1995, Tomo I, pp.260 y = 261.

(26) = Rodr=EDguez Cambronero,=20 Hazell y Otra. Op. = Cit. pp. 262 y 263.

(27) = Rodr=EDguez Cambronero Hazell y = Otra. Op. Cit.=20 pp. 271 y = 272.

(28) Maris = Mart=EDnez, Stella.=20 Op.Cit. pp. 196 y=20 197.

(29) Agencia = Reuter. Mapa=20 Humano. Citada por = La Naci=F3n,=20 lunes 5 de octubre de 1992, Suplemento Viva, p.2.

(30) = Rodr=EDguez Cambronero=20 Hazell y Otra. Op. Cit. Tomo II, p. 277 y 278.

(31) = Rodr=EDguez Gamboa,=20 Tatiana. Op. = Cit. p.16.

(32) Lorente Acosta = Jos=E9 Antonio y=20 Miguel. El ADN y la Identificaci=F3n en la Investigaci=F3n = Criminal y en la=20 Paternidad Biol=F3gica. Editorial Comares, = Granada- Espa=F1a,=20 1995, p.47.

(33) = Entrevista a Dr. Marta=20 Espinoza, Op. Cit. La doctora=20 Espinoza nos manifest=F3 que el A.D.N. tambi=E9n puede ubicarse en = las=20 mitocondrias, pero es de menor calidad para efectos = forenses.

(34) Minsky, = Larissa. La=20 Naci=F3n, 15 de agosto de 1993. Suplemento Revista Dominical. P.15.

(35) Minsky, = Larissa.=20 Ibid.

(36) = Rodr=EDguez Cambronero,=20 Hazell y Otra. Op. Cit. =20 p.288.

(37) = Rodr=EDguez Cambronero=20 Hazell y Otra. Ibid. p.293.

(38) = Rodr=EDguez Cambronero=20 Hazzel y Otra, Ibid. P. 337.

(39)Quevedo = Alina. Genes en Tela de Juicio. = Pruebas de=20 Identificaci=F3n por ADN: de los Laboratorios a los Tribunales. = Mc.Graw Hill/ = Interamericana de=20 Espa=F1a S.A. Madrid, 1997, p. 83.=20